G1和M期體細(xì)胞核在核移植后形態(tài)重建模式研究.pdf

1、自從世界上第一例體細(xì)胞核移植動物“Dolly”綿羊出生后，核移植已經(jīng)在多個物種取得成功，并且也得到了很多基因修飾的體細(xì)胞核移植動物。但不論那個物種，體細(xì)胞核移植的成功率都很低。有很多因素影響體細(xì)胞核移植的效率，其中受體胞質(zhì)的質(zhì)量和核移植時體細(xì)胞的周期就是兩個重要因素。本實驗研究了亮甲酚蘭(BCB)染色對豬卵母細(xì)胞的篩選效果。在GV期對豬卵母細(xì)胞進(jìn)行BCB染色后，分別檢查了著色組(BCB+)、未著色組(BCB-)、和對照組卵母細(xì)胞的成熟率

2、、激活后孤雌胚胎的早期發(fā)育能力和作為胞質(zhì)受體支持核移植胚胎早期發(fā)育的能力。本實驗還比較了G1早期與M期豬成纖維細(xì)胞核移植胚胎第一次卵裂前核形態(tài)學(xué)的變化及在體外的早期發(fā)育能力，觀察了G1早期成纖維細(xì)胞核融合進(jìn)入去核卵母細(xì)胞(eG1-NT胚胎)后2、4、6h的形態(tài)學(xué)事件；觀察了M期成纖維細(xì)胞核融合進(jìn)入去核卵母細(xì)胞(M-NT胚胎)后2、4、6、19、24h的形態(tài)學(xué)事件，并對兩種核移植胚胎第一細(xì)胞周期內(nèi)的形態(tài)學(xué)變化模式進(jìn)行了比較。同時也比較了e

3、G1-NT胚胎與M-NT胚胎在體外發(fā)育到囊胚的能力。取得如下結(jié)果： ⑴BCB+組卵母細(xì)胞發(fā)育到MⅡ期的比率(91.6％)顯著高于(P＜0.05)BCB-(64.0％)和對照組卵母細(xì)胞(77.5％):BCB+組孤雌胚胎的囊胚率(34.9％)顯著高于(P＜0.05)BCB-組(9.5％)和對照組(23.1％)；BCB+組核移植胚胎的囊胚率(23.0％)顯著高于(P＜0.05)BCB-組(5.0％)和對照組(14.1％)。 ⑵

4、在融合后2hM-NT胚胎與eG1-NT胚胎核有一半左右(50.0％和44.8％)處于膨大狀態(tài)；M-NT胚胎在融合后4h形成類原核的比例(77.8％)顯著高于融合后4h時eG1-NT胚胎形成類原核的比例(55.3％)(P＜0.05)。融合后6h絕大多數(shù)(89.3％和75.0％)M-NT胚胎與eG1-NT胚胎核形成了類原核。M-NT胚胎在融合后19h有77.4％具有兩個核，并且在融合后19h和24h觀察時都沒有發(fā)現(xiàn)排類極體(PBCs)的現(xiàn)象