細(xì)胞固定化生產(chǎn)納豆激酶的研究及細(xì)胞固定化反應(yīng)器的設(shè)計.pdf

1、本文對納豆菌細(xì)胞固定化技術(shù)生產(chǎn)納豆激酶的優(yōu)勢、納豆激酶的活性測定、納豆激酶的提取、純化、分子量的測定、細(xì)胞固定化裝置及反應(yīng)器的設(shè)置五個方面進(jìn)行了研究。研究結(jié)果表明，納豆菌細(xì)胞固定化比游離細(xì)胞產(chǎn)酶量高，第一批次酶活是游離細(xì)胞的1.6倍，高產(chǎn)酶量可以維持19批次。 本文采用纖維平板法測定納豆激酶的活性，用美藍(lán)染色法對傳統(tǒng)的纖維平板進(jìn)行了改進(jìn)，并以尿激酶為標(biāo)準(zhǔn)，測定納豆激酶發(fā)酵液酶活為7280(IU/mL)。 本文采用了等電點

2、法、鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法，對固定化細(xì)胞發(fā)酵液中的納豆激酶進(jìn)行了提取。發(fā)現(xiàn)丙酮沉淀法的效果最好，酶活收率最高，但是在納豆激酶的干燥過程中，酶活的收率不如鹽析法。丙酮沉淀粗酶液經(jīng)冷凍干燥后獲粗酶，單位酶活為302.627(IU/mg)，酶活收率為31.1％；鹽析沉淀粗酶液經(jīng)冷凍干燥后獲粗酶，單位酶活為164.017(IU/mg)，酶活收率為39.1(％)。發(fā)酵液經(jīng)丙酮沉淀法制得的一次層析凍干酶粉的酶活收率為12.2％，而經(jīng)鹽析法制得的一次

3、層析凍干酶粉的酶活收率為11.8％。 在納豆激酶的進(jìn)一步純化中發(fā)現(xiàn)，納豆激酶經(jīng)一次層析后單位酶活為799.750(IU/mg)，二次層析后納豆激酶純度雖得到了提高，但是酶活僅為155.1(IU/mg)。 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果表明，納豆激酶粗酶液的一次層析條帶較多，仍含有雜質(zhì)。二次層析的納豆激酶在分子量14.4kd處，只有一條條帶，且具有明顯的纖溶活性，說明經(jīng)二次層析后已經(jīng)獲得了電泳純的納豆激酶。 本文對