納豆激酶基因轉(zhuǎn)化生菜的初步研究.pdf

1、蘭州大學碩士學位論文納豆激酶基因轉(zhuǎn)化生菜的初步研究姓名：田曉玲申請學位級別：碩士專業(yè)：生物學、植物學指導教師：謝小冬20070501蘭州人學碩t 畢業(yè)論文 納豆撒酶摹岡轉(zhuǎn)化生菜的初步研究A b s t r a c tN a t t o k i n a s e ( N Es u b t i l i s i nN A T ) ，w h i c h i sp r o d u c e db yB a c i l l u ss u b t i l

2、 i s v a t ' ．n a t t o ，i sa s t r o n gf i b d n o l y t i ce n z y m ei nt h et r a d i t i o n a lJ 印a n e s es o y b e a nf o o dn a t t o ．T h ee n z y m e n o t o n l y s t r o n g l y h y d r o l y z e s t h

3、r o m b i i n v i v o ，b u ta l s o c o n v e r t sp l a s m i n o g e n t o p l a s m i n ．I nt h ep r e s e n ts t u d y ，8 4 9 b pg e n ef r a g m e n te n c o d i n gN K w a si n s e r t e d i n t ot h ep B I - 1 2 1

4、 v e c t o r ，w h i c h i sp l a n t e x p r e s s i o n v e c t o r ．T h e r e e o m b i n e n tp l a m i d ，d e s i g n a t e dp B I - 1 2 1 - N K , W a St r a n s f o r m e di n t o a g r o b a c t e r i u mt u m e f

5、a c i e n sv i at h ef r e e z e a n dt h a w m e t h o d ．T h e r e c o m b i n e n tp l a m i d ，n a m e dL B A 4 4 0 4 - p B I ·1 2 1 - N K , w a s s e l e c t e dt oi n f e c tl e a v e so f l e t t u c ew i t h

6、 t h ea g r o b a c t e r i u m - m e d i d a t e dl e a f d i s ct r a n s f o r m a t i o nm e t h o d ．T h er e s u l to ft r a n s f o r m a t i o n W a sa s s e s s e db yP C R , R T - P C Ra n a l y s i sa n ds e q

7、 u e n c ea n a l y s i s ，w h i c hi n d i c a t e d t h a tN K g e n eh a d b e e n i n l e g r a t c di n t og e n o m eo ft r a n s g e n i el e t t u c e ．T h i si s t h eb a s i cr e s e a r c hf o rt r a n s g e n

8、 i cl e t t u c ea sb i o r e a c t o rt ol a r g e ·s c a l ep r o d u c en a t t o k i n a s e ．T h e r e b y ，as e r i e so f c a r d i o v a s c u l a rd i s e a s e si n d u c e db yt h r o m b mc o u l db e p

9、r e v e n t e da n dc u r e dc o n v e n i e n t l y t h r o u g he a t i n g t h er a wt r a n s g e n i c l e t t u c e ．T h e r e s u l t s Ⅵ，e r e 嬲f o l l o w s ：1 ．n 圮c o n s t r u c t i o n o f t h e l e t t u c e

10、 r e g e n e r a t i o ns y s t e mW e e s t a b l i s h e dt w o k i n d s o f m e d i u m s ：T h ei n d u c i n gs h o o tm e d i u mi s ( M S +O ．1 i n g ／1 6 - B A + 0 ．0 5 m g ／lN A A ) ，a n dt h e i n d u c i n gr

11、o o tm e d i u mi s ( 1 ／2 M S + 0 ．3 m e ；，lN A A + 0 ．5 m g ／l I B A + O ．1 ％a c t i v e c a r b o n ) ．2 ．T h e c o n s t r u c t i o no f p B l 一1 2 1 - N KP C R a m p l i f i c a t i o no f N K g e n eW a sc a r r i

12、 e do u t ．A f t e ra g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i s ，t h ea m p l i f i e dN K P C R p r o d u c tW a sp u r i f i e da n dd i g e s t e d w i t hX b a Ia n dS a cI ．1 i g a t e dt ot h ep B I ·1 2 1

13、p l a s m i dc u tb yt h es a m er e s t r i c t i o ne n z y m e s ，i n t r o d u c e d i n t oE s c h e r i c h i ac o i lD H 5 以t h e r e c o m b i n e n tW a sn a m e d a st h ep l a n te x p r e s s i o nv e c t o r