基于新型納米復(fù)合物修飾的前列腺特異性抗原免疫傳感器的研究.pdf

1、由于生物傳感器具有選擇性好,靈敏度高,分析速度快,操作簡易,價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn),甚至可以實(shí)時(shí)在線檢測(cè)及活體分析,因此成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一。目前,基于在電極上直接電子轉(zhuǎn)移的第三代電化學(xué)生物傳感器是當(dāng)前生物傳感器的研究熱點(diǎn),而納米材料所具有的獨(dú)特物理化學(xué)性質(zhì)為第三代電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建提供了一條嶄新的途徑。利用納米材料比表面積大的特點(diǎn)及良好的生物兼容性,增大了固定在電極上的抗體量,并使抗體保持良好的生物活性,從而提高了傳感器的靈敏度。因此如

2、何將多種納米復(fù)合物及顆粒有效地固定在電極表面,并保持其協(xié)同增加電子傳遞的能力是生物傳感器研究和開發(fā)中最為重要的環(huán)節(jié)。
　　 目的：
　　 建立靈敏、特異的基于納米復(fù)合物及顆粒修飾PSA電流型免疫傳感器,優(yōu)化影響電子傳遞速率的實(shí)驗(yàn)條件,并進(jìn)行電化學(xué)特性表征研究。同時(shí)與現(xiàn)有檢測(cè)前列腺特異性抗原的化學(xué)發(fā)光法比較,分析其用于臨床檢測(cè)前列腺特異性抗原(PSA)的可行性及主要優(yōu)勢(shì)與不足。
　　 材料與方法
　　 1、

3、用丙酮、乙醇、雙蒸水超聲清洗氧化銦錫(ITO)。
　　 2、將多壁碳納米管(MWNT)置于30％硝酸中超聲4h以引入羧基,接著用雙蒸水清洗至中性,烘干。
　　 3、制備普魯士蘭.殼聚糖(CS-PB)納米復(fù)合物、納米金(Aunano)、普魯士蘭-納米金(Aunano-PB)納米復(fù)合物、氨基硅烷化-葡聚糖-四氧化三鐵(AEAPS-Dextran-Fe3O4)磁性納米復(fù)合物。
　　 4、用紫外分光光度計(jì)觀察CS-PB、

4、Aunano-PB、AEAPS-Dextran-Fe3O4特征吸收峰和透射電鏡觀察CS-PB、AEAPS-Dextrail-Fe3O4的形態(tài)和直徑,并用原子吸收分光光度計(jì)法測(cè)定AEAPS-Dextran-Fe3O4中鐵的含量,葸酮-硫酸法測(cè)定葡聚糖的含量。
　　 5、制備電流型免疫傳感器BSA/anti-PSA/Aunano/CS-PB/MWNT/DpAu/ITO和BSA/anti-PSA/Aunano/AEAPS-Dextra

5、n-Fe3O4/Aunano-PB/ITO。
　　 6、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,在0.1 mol/L的PBS(pH=7.0)緩沖液中,用循環(huán)伏安法對(duì)制備的傳感器進(jìn)行電化學(xué)表征,并觀察傳感器檢測(cè)的靈敏度、線性響應(yīng)范圍等。
　　 7、做方法學(xué)實(shí)驗(yàn)(干擾實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收實(shí)驗(yàn)和對(duì)比實(shí)驗(yàn))對(duì)傳感器的各項(xiàng)性能作出評(píng)價(jià)。
　　 結(jié)果：
　　 1、通過超聲清洗,得到干凈的ITO電極,備用。
　　 2、通過在30％

6、硝酸中超聲反應(yīng),使MWNT成功引入羧基。
　　 3、成功制備CS-PB納米復(fù)合物、Aunano、Aunano-PB納米復(fù)合物、AEAPS-Dextran-Fe3O4磁性納米復(fù)合物,并用紫外分光光度計(jì)和透射電鏡進(jìn)行表征。
　　 4、通過實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化,初步制備出可以檢測(cè)PSA電流型免疫傳感器并建立相應(yīng)的檢測(cè)方法。在最適條件下,傳感器可在10min完成檢測(cè),與傳統(tǒng)的免疫傳感器相比,該傳感器檢測(cè)的靈敏度更高、線性范圍變寬,穩(wěn)定

7、性、重復(fù)性、回收率等較好。
　　 5、構(gòu)建的新型納米復(fù)合物修飾的電化學(xué)免疫傳感器與傳統(tǒng)的免疫分析方法做對(duì)比實(shí)驗(yàn),檢測(cè)臨床標(biāo)本結(jié)果相近,說明所制備傳感器可用于臨床標(biāo)本檢測(cè)。
　　 結(jié)論：
　　 應(yīng)用納米復(fù)合物CS-PB、Aunano-PB、AEAPS-Dextran-Fe3O4和納米顆粒Aunano、MWNT通過自組裝、電聚合等技術(shù),成功制備兩種免標(biāo)記的PSA電流型免疫傳感器。初步證明該方法操作簡單、響應(yīng)快、特異性