細胞色素P450的高效原核表達及應用于持久性有機污染物的檢測.pdf

1、細胞色素P450是包含一個血紅素蛋白的超大家族，它被發(fā)現存在于所有的生物有機體中：從細菌、酵母、真菌、植物、動物以至于人體，這個酶引人注目的特點是能夠催化廣泛的有機化合物的反應，能使有害物質轉變成為可溶物從體內排出。因此它在各種生物合成和生物降解中起著重要的作用。
　　 本論文對家蠅細胞色素P4506A1(CYP6A1)和大鼠細胞色素P4501A1 (CYP1A1)這兩個基因在大腸桿菌中克隆和表達進行了研究，表達的蛋白質進行了初

2、步的分離和純化，并構建生物傳感器以分別用于持久性有機污染物艾氏劑、七氯和苯并芘的分析檢測。在此工作的基礎上，進一步研究了CYP1A1基因在煙草表達與組織定位，以用于環(huán)境中苯并芘的生物修復研究。
　　 通過PCR擴增得到CYP6A1及CYP1A1基因的ORF序列，并經過一定的改造與原核表達載體pCW連接，構建了重組載體pCW/CYP6A1和pCW/ CYP1A1，轉化到大腸桿菌菌株DH5α中，并用IPTG誘導表達。經SDS-PAG

3、E分析表明，CYP基因的表達產物的分子量大小與預期相符，對CYP6A1及CYP1A1基因表達產物進行初步提取純化。
　　 用表面活性劑雙十八烷基二甲基溴化銨(DSAB)和雙十六烷基磷酸(DHP)分別固定初步純化的蛋白CYP6A1和CYP1A1于熱裂解石墨電極表面，構建相應的生物傳感器，并分別應用于其相應底物艾氏劑和七氯及苯并芘的催化氧化研究和分析檢測。
　　 用植物表達載體pCANMBIA1302(含綠色熒光蛋白GFP)