磺胺-5-甲氧嘧啶殘留酶聯(lián)免疫分析試劑盒的研制.pdf

1、磺胺類藥物是獸醫(yī)臨床上使用最廣的一類化學(xué)合成抗菌藥，主要用于細(xì)菌感染性疾病和某些原蟲病的預(yù)防和治療。由于不合理使用藥物，導(dǎo)致磺胺類藥物在可食用動(dòng)物組織中的殘留，最終對(duì)食品安全和人類健康造成危害。 許多國(guó)家已經(jīng)規(guī)定磺胺藥在人類食用組織中的殘留限量為0.1mg/kg，有些甚至不得檢出。檢測(cè)磺胺類藥物殘留經(jīng)常采用色譜分析方法和酶免疫測(cè)定法。色譜法雖然十分靈敏、準(zhǔn)確，但樣品前處理繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、耗資大、技術(shù)性要求高，且要有昂貴的儀器，

2、不適合大量樣品的篩選測(cè)定。酶免疫測(cè)定法因其快速、靈敏、高效正越來(lái)越受到歡迎。用ELISA原理制成試劑盒，可以更方便地為實(shí)際避用。酶免疫法應(yīng)是將來(lái)用于藥物殘留檢測(cè)的主流方法，是將來(lái)殘留檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì)。 本研究通過(guò)抗原的合成和抗體的制備，通過(guò)ELISA測(cè)定方法，檢洲了實(shí)驗(yàn)條件下雞體內(nèi)SMD的殘留變化。 復(fù)蘇凍行的單克隆抗體細(xì)胞株，用有限稀釋法將細(xì)胞進(jìn)行克隆。最終產(chǎn)生了六株穩(wěn)定分泌針對(duì)SMD抗體的細(xì)胞：B6、D12、E2、H5

3、、(8、G11。將H5細(xì)胞注入小鼠的腹腔，制備出腹水。 制備的腹水同人工抗原作方陣實(shí)驗(yàn)，確定抗原、抗體的工作濃度為1∶5000和1∶100000。 通過(guò)對(duì)雞進(jìn)行藥物實(shí)驗(yàn)，完善了樣品前處理方法，測(cè)定了雞體內(nèi)SMD的殘留。 改進(jìn)了ELISA的底物顯色系統(tǒng)，本實(shí)驗(yàn)采用TMB顯色系統(tǒng)，并確定了TMB和過(guò)氧化氫尿素的最終工作濃度。 按試劑盒的要求對(duì)試劑盒中的各種試劑的保存方法、條件、時(shí)間等進(jìn)行大量實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：保