退黑素對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷保護(hù)作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、褪黑素對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷神經(jīng)保護(hù)作用的研究
　　 目的：應(yīng)用蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷模型，探討褪黑素對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷是否具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 方法：48只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=12)，SAH組(n=12)，安慰劑組(n=12)和褪黑素治療組(n=12)。應(yīng)用視交叉前池一次注血法制成SAH后EBI模型，在蛛網(wǎng)膜下腔出血后2h和

2、24h分別腹腔注射褪黑素,48小時(shí)后處死大鼠，取顳底皮層腦組織做標(biāo)本，測(cè)定腦水腫變化及血腦屏障變化；同時(shí)觀察SD大鼠行為功能變化，進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，探討褪黑素對(duì)大鼠SAH后EBI是否具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比，SAH組大鼠神經(jīng)認(rèn)知功能明顯降低，食欲及活動(dòng)能力明顯降低，腦組織含水量明顯增加,48h時(shí)水腫百分?jǐn)?shù)達(dá)到82.51％，血腦屏障破壞明顯,48h時(shí)測(cè)定皮層腦組織EB含量達(dá)到21.5 ng/mg;與SAH組相比

3、，褪黑素治療后大鼠神經(jīng)功能明顯改善，腦水腫指數(shù)降低,48h時(shí)水腫百分?jǐn)?shù)80.55%，血腦屏障功能改善,48h時(shí)測(cè)定皮層腦組織EB含量13.2ng/mg;安慰劑組與SAH組相比改善不明顯。
　　 結(jié)論：1．通過(guò)構(gòu)建大鼠SAH模型，能夠觀察到大鼠SAH后48h神經(jīng)認(rèn)知功能明顯降低，腦組織水腫含量增加明顯，血腦屏障破壞明顯，說(shuō)明SAH后存在EBI。2．應(yīng)用褪黑素治療后，能有效降低SAH后腦水腫、改善血腦屏障，改善神經(jīng)認(rèn)知功能，提示褪黑

4、素對(duì)大鼠SAH后EBI具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 第二部分、褪黑素對(duì)大鼠SAH后大腦皮層Nrf2-ARE傳導(dǎo)通路的調(diào)控作用
　　 目的：研究SAH后大腦皮層Nrf2-ARE傳導(dǎo)通路及其下游產(chǎn)物的表達(dá)變化及褪黑素對(duì)Nrf2-ARE傳導(dǎo)通路的干預(yù)作用，探討褪黑素對(duì)SAH后EBI神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。
　　 方法：48只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為：對(duì)照組(n=12)，SAH組(n=12)，SAH+安慰劑組(n=12)和SA

5、H+褪黑素治療組(n=12)。采用立體定向注射技術(shù)，構(gòu)建視交叉前池一次注血SAH模型，對(duì)照組開(kāi)骨窗但不注入動(dòng)脈血，褪黑素治療組給予褪黑素注射治療，每次注射劑量150mg/kg，在SAH后2h、24h分別腹腔注射，共注射2次。安慰劑組注射等容量溶劑，溶劑為1％乙醇。48小時(shí)后處死大鼠，取顳底皮層腦組織做標(biāo)本，采用Westem blot法測(cè)定Nrf2、HO-1表達(dá)情況；免疫組化法檢測(cè)Nrf2及HO-1表達(dá)，RT-PCR測(cè)定HO-1、NQ01

6、及GST-α1的mRNA表達(dá)，酶活性檢測(cè)NQO1及GST-α1，TUNEL技術(shù)測(cè)定神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：Western blot結(jié)果顯示對(duì)照組Nrf2和HO-1蛋白水平較弱；與對(duì)照組相比，SAH組Nrf2和HO-1蛋白水平明顯增高(P<0.05)；SAH組與安慰劑組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)；褪黑素治療組中Nrf2和H0-1蛋白水平明顯高于安慰劑組(P<0.01)。免疫組化(Nrf2和H0-1蛋白免疫反應(yīng)性主要在神經(jīng)元

7、細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)棕色黃染代表陽(yáng)性)結(jié)果顯示對(duì)照組Nrf2和H0-1陽(yáng)性率較低；與對(duì)照組相比，SAH組Nrf2和H0-1陽(yáng)性率明顯增高(P0.05)；褪黑素治療組中Nrf2和H0-1陽(yáng)性率低于SAH組及安慰劑組(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示對(duì)照組HO-1、NQ01及GST-α1的mRNA表達(dá)水平較弱；與對(duì)照組相比，SAH組H0-1、NQ01及GST-α1的mRNA表達(dá)水平明顯增高(P

8、<0.01)；SAH組與安慰劑組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>O.05)；褪黑素治療組中HO-1、NQ01及GST-α1的mRNA表達(dá)水平明顯高于SAH+Vehicle組(P<0.01)。酶活性檢測(cè)提示SAH及安慰劑組NQ01及GST-α1的酶活性明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，SAH組與安慰劑組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>O.05)，褪黑素治療組NQ01及GST-α1的酶活性明顯高于SAH組(P