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文檔簡介
1、目的:
蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachoid hemorrhage,SAH)是臨床上一種高死亡率和致殘率的常見疾病,約占所有卒中病例的5-7%。過去對其研究主要聚焦在SAH后的腦血管痙攣及其治療上;然而,研究表明單純治療和控制血管痙攣并不能特別有效地改善SAH的預(yù)后,近來針對SAH后早期腦損傷的研究逐漸增多,能否通過抑制SAH后早起腦損傷的發(fā)生從而降低SAH死亡率改善預(yù)后成為了研究的一個重要方向。
丁苯酞又名芹菜甲
2、素,最初為提取于芹菜籽的一種物質(zhì),現(xiàn)已人工合成其消旋體,目前主要用于急性缺血性腦卒中的治療,目前研究表明其有改善腦血流量、減輕腦水腫、保護(hù)神經(jīng),促進(jìn)患者神經(jīng)功能缺損的改善,作用于缺血性腦卒中所致腦損傷的多個病理生理環(huán)節(jié),改善腦的能量代謝,抑制血栓形成,減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用;SAH發(fā)生后亦有與缺血性卒中類似的微循環(huán)障礙、腦組織缺血等病理過程的發(fā)生,由于蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)生后導(dǎo)致組織損傷的過程中的中也有類似的病理過程,目前少有將其應(yīng)用于蛛網(wǎng)
3、膜下腔出血的報道,在SAH發(fā)生的情況下,其是否能對SAH的病理發(fā)展過程產(chǎn)生干預(yù)保護(hù)作用,改善SAH的預(yù)后,目前尚未明確。因此,本實驗通過將丁苯酞應(yīng)用于 SAH大鼠模型,希望能通過檢測丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)以及細(xì)胞死亡情況以了解丁苯酞對SAH大鼠模型發(fā)生的早起腦損傷是否有保護(hù)作用。
材料和方法:
1、實驗材料成年SPF級SD大鼠60只,
4、其中雌性與雄性各30只,體重250~330g,由廣東省實驗動物中心提供,于廣州醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心SPF級動物房普通飼料喂養(yǎng)1~2周后行枕大池注血法建立蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。
2、實驗方法動物隨機(jī)分為6組,分別分假手術(shù)組、對照組、實驗組,每組又根據(jù)時點(diǎn)不同分為24小時組與12小時組,每組10只,每組動物中分別取5只用于獲取組織勻漿,余下5只進(jìn)行制作石蠟切片。對于實驗組大鼠術(shù)后即予丁苯酞氯化鈉注射液2.5mg/kg腹腔注射,對照組
5、予等體積生理鹽水替代,空白對照組不打開蛛網(wǎng)膜下腔與向其中注血。按對應(yīng)不同組別不同時點(diǎn)分別取腦組織勻漿與固定后獲取組織石蠟切片。所獲得的勻漿液利用硫代巴比妥酸(TBA)法測得MDA含量,雙抗體夾心法(ELISA)法測得大鼠TNF-α、IL-1β、ICAM-1含量,并同時利用BCA(bicinchoninic acid)法測得各標(biāo)本蛋白含量進(jìn)行對照。所獲得的石蠟切片利用TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl tran
6、sferase dUTP nick end labeling),末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口末端標(biāo)記)熒光檢測方法得到細(xì)胞凋亡情況,并經(jīng)Image-Pro Plus6.0軟件處理獲得死亡細(xì)胞數(shù)及總細(xì)胞數(shù)目。各項指標(biāo)檢測結(jié)果根據(jù)不同時點(diǎn)及是否給藥進(jìn)行T檢驗及χ2檢驗來進(jìn)行比較分析,設(shè)定當(dāng)P<0.05時認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)果:
1、死亡率:假手術(shù)組術(shù)后未出現(xiàn)大鼠死亡,經(jīng)χ2檢驗,SAH術(shù)后12小時與24小時組之
7、間p>0.05,給藥組與非給藥組之間P>0.05,無統(tǒng)計學(xué)意義。
2、MDA:12小時假手術(shù)組與24小時假手術(shù)組MDA含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。SAH術(shù)后12小時及24小時給藥組與非給藥組MDA含量均有顯著升高,各組與假手術(shù)組相比其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),12小時給藥組與24小時給藥組,12小時對照組與24小時對照組之MDA含量有所差異,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。12小時給藥組較12小時對照組MDA
8、含量較低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。24小時給藥組較24小時對照組MDA含量亦較低。
3、TNF-α、IL-β及ICAM-1:假手術(shù)組12小時組與24小時組組間TNF-α測定值差異無統(tǒng)計學(xué)意義,SAH組12小時及24小時給藥組與非給藥組TNF-α測定值均有升高,各組與假手術(shù)組相比其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),12小時與24小時組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。12小時組實驗組較對照組TNF-α含量較低,有統(tǒng)計學(xué)
9、意義(P<0.05)。24小時組實驗組較對照組TNF-α含量較低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
兩組假手術(shù)空白對照組組間IL-1β濃度含量測定值差異無統(tǒng)計學(xué)意義,SAH組12小時及24小時給藥組與非給藥組IL-β測定值均有升高,各組與假手術(shù)組相比其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),SAH組12小時與24小時組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。12小時組實驗組較對照組IL-1β含量較低,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
10、24小時組實驗組較對照組TNF-α均值較低,但其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
假手術(shù)空白對照組組間組織ICAM-1差異無統(tǒng)計學(xué)意義,SAH組12小時及24小時給藥組與非給藥組ICAM-1測定值均有升高,各組與假手術(shù)組相比其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),SAH組12小時與24小時組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。SAH12小時組與24小時組實驗組較對照組ICAM-1均值較低,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。<
11、br> 4、細(xì)胞死亡:12小時與24小時空白對照組都極少見死亡細(xì)胞,12小時對照組死亡率高于12小時實驗組(P<0.05),24小時對照組死亡率高于24小時實驗組(P<0.05),24小時對照組與12小時對照組相比較其死亡率增高,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),24小時實驗組較12小時實驗組其死亡率較高(P<0.05)
結(jié)論:SAH發(fā)生后的早期,其腦組織中MDA、TNF-α、IL-β以及ICAM-1均有升高,這可能與SAH后
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