非小細(xì)胞肺癌患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化及CpG ODN的干預(yù)作用.pdf

1、第一部分非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化
　　[目的]觀察非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例以及TGF-β和IFN-γ水平的變化情況，探討非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞變化的相關(guān)因素。
　　[方法]選擇30例于2008年5月～9月入住復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院的初診、初治的肺癌患者，手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)病理證實為非小細(xì)胞肺癌。健康志愿者30例。分離其外周血單個

2、核細(xì)胞(PBMC)，用流式細(xì)胞儀檢測CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例，Real-time PCR檢測Foxp3基因的表達(dá)，ELISA法檢測TGF-β及IFN-γ水平。
　　[結(jié)果]非小細(xì)胞肺癌患者PBMC中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占總CD4+T細(xì)胞比例為42.14±14.32％、Foxp3基因的相對表達(dá)量為0.96±0.44、TGF-β水平為67.24±8.79 pg/ml，均高于健康志愿者(CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

3、比例為8.42±2.69％、Foxp3基因的相對表達(dá)量為0.66±0.09、TGF-β水平為33.58±4.74 pg/ml)，差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但非小細(xì)胞肺癌患者上述指標(biāo)在不同病理分型、臨床分期、病理分級的亞組內(nèi)比較無顯著性差異。非小細(xì)胞肺癌患者和健康志愿者外周血中的IFN-γ水平分別為30.40±9.52 pg/ml和33.33±20.02pg/ml，兩者比較無顯著性差異(P>0.05)。非小細(xì)胞肺癌患者外周

4、血中TGF-β水平與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例呈直線相關(guān)性(偏回歸系數(shù)=0.598，P=0.046)。
　　[結(jié)論]非小細(xì)胞肺癌患者外周血中存在CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例及TGF-β水平升高的現(xiàn)象，與病理分型、臨床分期、病理分級無關(guān)。外周血中TGF-β水平與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例呈直線相關(guān)性。
　　第二部分非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤微環(huán)境及轉(zhuǎn)移/未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中Foxp3基因的表達(dá)
　　

5、[目的]觀察非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤微環(huán)境及轉(zhuǎn)移/未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中Foxp3基因的表達(dá)情況。
　　[方法]入組的非小細(xì)胞肺癌患者同第一部分。取術(shù)后肺癌組織及淋巴結(jié)石蠟切片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法觀察非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織內(nèi)、腫瘤組織與正常肺組織交界處(簡稱交界處)及轉(zhuǎn)移/未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞表達(dá)Foxp3的陽性程度。應(yīng)用ELISA法檢測肺癌組織勻漿中TGF-β及IFN-γ水平。
　　[結(jié)果]非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織和交界處淋巴細(xì)

6、胞表達(dá)陽性Foxp3的OD值分別為14.06±4.14和13.29±3.81，兩者比較無顯著性差異(P>0.05)；在不同病理類型亞組中，腺鱗癌在腫瘤組織及交界處表達(dá)Foxp3的陽性程度均強(qiáng)于鱗癌(20.50 vs12.33±2.59；19.90 vs11.52±2.25，P<0.05)，但鱗癌與腺癌或腺癌與腺鱗癌之間的比較無顯著性差異(P>0.05)；在不同臨床分期亞組中，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期在腫瘤組織表達(dá)Foxp3的OD值分別為15.22±

7、3.07、16.58±2.95、18.17±1.82，均明顯高于Ⅰ期(9.35±0.81，P<0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期在交界處表達(dá)陽性Foxp3的OD值分別為13.98±3.61、15.48±2.73、17.33±1.99，也均明顯高于Ⅰ期(9.25±0.71，P<0.05)，但Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三期的亞組內(nèi)比較無顯著性差異(P>0.05)。在不同病理分級亞組中，Ⅱ級、Ⅱ～Ⅲ級、Ⅲ級在腫瘤組織或交界處表達(dá)Foxp3的陽性程度比較均無顯著性差異(

8、P>0.05)。轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞表達(dá)Foxp3的陽性程度要明顯強(qiáng)于未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)(16.28±3.31 vs8.62±0.74，P<0.05)。除腺麟癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)表達(dá)Foxp3的陽性程度明顯強(qiáng)于鱗癌外(19.60 vs11.88±0.85，P<0.05)，其他不同病理類型、不同臨床分期、不同病理分級亞組在轉(zhuǎn)移或未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中表達(dá)Foxp3陽性程度的組內(nèi)比較均不具有顯著性差異(P>0.05)。非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織勻漿中TGF-β及I

9、FN-γ水平在不同病理分型、臨床分期、病理分級亞組內(nèi)的比較均無顯著性差異(P>0.05)。
　　[結(jié)論]非小細(xì)胞肺癌患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞表達(dá)Foxp3的陽性程度明顯高于未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)，且中晚期患者腫瘤微環(huán)境中淋巴細(xì)胞表達(dá)Foxp3的陽性程度高于早期患者。
　　第三部分 CpG ODN對非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響
　　[目的]探討CpG ODN對非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD4+CD25

10、+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、Foxp3基因的表達(dá)及TGF-β、IFN-γ的干預(yù)作用。
　　[方法]入組的非小細(xì)胞肺癌患者同第一部分。將非小細(xì)胞肺癌患者的PBMC隨機(jī)分為實驗組和安慰劑組，每組各15例。分別給予1μM的CpG ODN2006或安慰劑CpG ODN1612干預(yù)，比較干預(yù)前后兩組外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例、Foxp3基因的表達(dá)及TGF-β、IFN-γ水平的變化情況。
　　[結(jié)果]CpG ODN干預(yù)后，CpG O

11、DN2006實驗組的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例、Foxp3基因的相對表達(dá)量及TGF-β水平出現(xiàn)了下降(分別為44.16±11.61 vs36.52±10.78％：1.15±0.48 vs0.65±0.17；68.25±9.25 vs58.22±4.16)，差異均具有顯著性(P<0.05)。CpG ODN1612安慰劑組的上述指標(biāo)在干預(yù)前后則無顯著性改變(40.11±16.76 vs40.92±16.93％；0.77±0.33 v