表皮生長(zhǎng)因子受體反義重組腺病毒治療乳腺癌及對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)是原癌基因HER1(c-erbB1)的表達(dá)產(chǎn)物，在許多惡性腫瘤細(xì)胞中超量表達(dá)、基因擴(kuò)增和/或基因突變，并借助其介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)使細(xì)胞生長(zhǎng)失控和惡性轉(zhuǎn)化。在前期的乳腺癌實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜕希覀儼l(fā)現(xiàn)EGFR的表達(dá)隨著腫瘤發(fā)生能力的增強(qiáng)而提高，而且EGFR反義RNA表達(dá)載體可逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化表型。為了尋求治療乳腺癌的新手段，我們開發(fā)了EGFR反義重組腺病毒，并通過(guò)觀察其對(duì)MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞裸鼠動(dòng)物模型抑制腫瘤細(xì)胞增殖及

2、引起腫瘤壞死的作用，提示其可作為治療乳腺癌的新手段。 隨后，我們又將該EGFR反義重組腺病毒作用于U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，觀察并檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞的作用。 一、EGFR反義重組腺病毒治療乳腺癌的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究人EGFR的cDNA片段被反向亞克隆入E1/E3缺失的5型腺病毒載體中而得到AdE5，EGFR反義RNA的表達(dá)由CMV啟動(dòng)子控制；MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞系常規(guī)培養(yǎng)；MDA-MB-231接種于裸鼠右側(cè)背部皮下形成腫瘤

3、后，以AdE5、空病毒載體AdCO1瘤內(nèi)注射，每只109pfu/100μ1，共注射2次；定期測(cè)量腫瘤體積，計(jì)算相對(duì)生長(zhǎng)率，可以觀察到AdE5瘤內(nèi)注射可抑制腫瘤生長(zhǎng)(相對(duì)生長(zhǎng)率＜1)；處死裸鼠取出腫瘤組織，將瘤塊進(jìn)行HE染色后做組織學(xué)觀察，可見(jiàn)AdE5治療后的腫瘤組織切片HE染色顯示腫瘤中心壞死明顯；以免疫組化分析Ki-67表達(dá)，發(fā)現(xiàn)AdE5治療后腫瘤Ki-67指數(shù)顯著低于AdCO1及PBS組。可見(jiàn)，以腺病毒載體介導(dǎo)的EGFR反義RNA轉(zhuǎn)

4、導(dǎo)可有效地抑制乳腺癌細(xì)胞的在體腫瘤生長(zhǎng)。 二、EGFR反義重組腺病毒對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系常規(guī)培養(yǎng)；將攜帶綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)報(bào)告基因的5型腺病毒感染U251細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)，以300的感染復(fù)數(shù)(MOI)轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后既有近95％的細(xì)胞內(nèi)有GFP的表達(dá)，說(shuō)明腺病毒對(duì)U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞系有很高的轉(zhuǎn)染效率；以RT-PCR方法檢測(cè)反義RNA的轉(zhuǎn)染效率及在細(xì)胞內(nèi)的