表皮生長因子受體反義重組腺病毒治療乳腺癌及對膠質(zhì)瘤細胞作用的實驗研究.pdf

1、表皮生長因子受體(EGFR)是原癌基因HER1(c-erbB1)的表達產(chǎn)物，在許多惡性腫瘤細胞中超量表達、基因擴增和/或基因突變，并借助其介導的信號傳導使細胞生長失控和惡性轉(zhuǎn)化。在前期的乳腺癌實驗模型上，我們發(fā)現(xiàn)EGFR的表達隨著腫瘤發(fā)生能力的增強而提高，而且EGFR反義RNA表達載體可逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化表型。為了尋求治療乳腺癌的新手段，我們開發(fā)了EGFR反義重組腺病毒，并通過觀察其對MDA-MB-231人乳腺癌細胞裸鼠動物模型抑制腫瘤細胞增殖及

2、引起腫瘤壞死的作用，提示其可作為治療乳腺癌的新手段。 隨后，我們又將該EGFR反義重組腺病毒作用于U251人膠質(zhì)瘤細胞系，觀察并檢測其對細胞的作用。 一、EGFR反義重組腺病毒治療乳腺癌的動物實驗研究人EGFR的cDNA片段被反向亞克隆入E1/E3缺失的5型腺病毒載體中而得到AdE5，EGFR反義RNA的表達由CMV啟動子控制；MDA-MB-231人乳腺癌細胞系常規(guī)培養(yǎng)；MDA-MB-231接種于裸鼠右側(cè)背部皮下形成腫瘤

3、后，以AdE5、空病毒載體AdCO1瘤內(nèi)注射，每只109pfu/100μ1，共注射2次；定期測量腫瘤體積，計算相對生長率，可以觀察到AdE5瘤內(nèi)注射可抑制腫瘤生長(相對生長率＜1)；處死裸鼠取出腫瘤組織，將瘤塊進行HE染色后做組織學觀察，可見AdE5治療后的腫瘤組織切片HE染色顯示腫瘤中心壞死明顯；以免疫組化分析Ki-67表達，發(fā)現(xiàn)AdE5治療后腫瘤Ki-67指數(shù)顯著低于AdCO1及PBS組?？梢?，以腺病毒載體介導的EGFR反義RNA轉(zhuǎn)

4、導可有效地抑制乳腺癌細胞的在體腫瘤生長。 二、EGFR反義重組腺病毒對膠質(zhì)瘤細胞作用的實驗研究U251人膠質(zhì)瘤細胞系常規(guī)培養(yǎng)；將攜帶綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)報告基因的5型腺病毒感染U251細胞系，發(fā)現(xiàn)，以300的感染復數(shù)(MOI)轉(zhuǎn)染細胞48h后既有近95％的細胞內(nèi)有GFP的表達，說明腺病毒對U251膠質(zhì)瘤細胞系有很高的轉(zhuǎn)染效率；以RT-PCR方法檢測反義RNA的轉(zhuǎn)染效率及在細胞內(nèi)的