反義表皮生長因子受體對人肺癌細胞系放射敏感性影響的實驗研究.pdf

1、目的：觀察antisenseEGFR對肺腺癌細胞系的生長作用和放療增敏作用，為臨床開展放射治療聯(lián)合基因治療提供實驗依據(jù)。 方法：用免疫組化法檢測EGFR高表達的肺腺癌細胞系spc-a-1。擴增并提取pcDNA3-antisenseEGFR質粒和pcDNA3空質粒，在脂質體介導下用質粒pcDNA3-antisenseEGFR轉染spc-a-1細胞，并以空質粒pcDNA3轉染spc-a-1細胞做對照。用G418篩選穩(wěn)定表達的細胞克隆

2、，以RT-PCR和Westernblot檢測轉染后EGFR的mRNA及蛋白表達抑制情況，流式細胞儀檢測轉染后細胞周期的變化，繪制生長曲線，評價細胞生長情況。然后分為五個實驗組：未轉染的細胞(正常細胞組)，單純放療組，單純pcDNA3-antisenseEGFR轉染組，空質粒pcDNA3轉染+放療組，pcDNA3-antisenseEGFR轉染+放療組。給予6MVX射線，800cGy劑量照射，48h后用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況，生長曲線

3、檢測細胞生長情況。 結果：轉染pcDNA3-antisenseEGFR組與未轉染細胞組、空載體轉染組比較，EGFRmRNA和蛋白表達量明顯減少，細胞生長延遲，細胞周期阻滯在G2、M期，S期細胞減少，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，而正常細胞組和空載體轉染組間無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。轉染pcDNA3-antisenseEGFR+放療組與未轉染的細胞(正常細胞組)、單純放療組、單純pcDNA3-antisenseEGFR轉染組、