原發(fā)性開角型青光眼大家系致病基因篩查研究.pdf

1、目的：探討小梁網(wǎng)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)反應(yīng)蛋白（MYOC）基因、視神經(jīng)病變誘導(dǎo)反應(yīng)蛋白（OPTN）基因、細(xì)胞色素P450超家族1亞家族（CYP1B1）基因、T細(xì)胞激動(dòng)WD重復(fù)蛋白（WDR36）基因與原發(fā)性開角型青光眼（POAG）家系發(fā)病的關(guān)系。
　　對(duì)象：收集一個(gè)包括4代共47人的POAG家系，其中11人確診為POAG，余36人為正常人。POAG患者中，4位已經(jīng)接受雙眼抗青眼手術(shù)，1位接受左眼抗青光眼手術(shù)，術(shù)后眼壓均控制良好。共采集到31

2、份血樣，其中7人為POAG患者，余24人為正常人。
　　方法：⑴4代31人進(jìn)行嚴(yán)格眼科檢查，各抽取外周血10ml；⑵使用Wizard Genomic DNA Purification試劑盒提取和純化31位家系成員的外周靜脈血基因組DNA；⑶根據(jù)已知青光眼致病基因MYOC和CYP1B1的DNA序列，設(shè)計(jì)和合成相應(yīng)的PCR引物6對(duì)，抽取家系中的一位POAG患者Ⅱ:14，將Ⅱ:14基因組DNA做為模板，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)擴(kuò)增MY

3、OC和CYP1B1基因的編碼外顯子及剪切連接區(qū)域；⑷將PCR產(chǎn)物純化并進(jìn)行正向和反向DNA測序；⑸對(duì)于POAG其他的兩個(gè)候選基因OPTN和WDR36，選擇位于基因兩側(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）為分子遺傳學(xué)標(biāo)記，設(shè)計(jì)4對(duì)STR引物，擴(kuò)增相應(yīng)的DNA序列，進(jìn)行STR分型分析和單體型構(gòu)建，以排查該家系患者的致病性是否與這兩個(gè)候選基因相關(guān)。
　　結(jié)果：DNA常規(guī)測序分析顯示該家系患者不存在MYOC和CYP1B1基因編碼區(qū)和剪切位點(diǎn)致病性突變