嬰幼兒型青光眼和青少年型青光眼的候選基因篩查和定位.pdf

1、青光眼是一種具有遺傳異質(zhì)性的重要致盲眼病，主要與病理性眼壓升高有關(guān)，以進(jìn)行性的視神經(jīng)損害為特征。本研究從分子遺傳學(xué)角度，采用候選基因篩查和基因定位的方法探討青光眼的病因。 第一部分：嬰幼兒型青光眼散發(fā)病例的候選基因篩查 目的：旨在揭示我國(guó)原發(fā)性嬰幼兒型青光眼患者的CYP1B1基因和MYOC基因突變的種類和數(shù)量。 方法：收集116例原發(fā)性嬰幼兒型青光眼患者，抽取少量外周血，提取基因組DNA，使用PCR的方法擴(kuò)增CY

2、P1B1基因的編碼外顯子區(qū)域和啟動(dòng)子區(qū)域以及MYOC基因的編碼外顯子區(qū)域，直接測(cè)序?qū)ふ彝蛔?。另?20位健康成年人以相同的方法檢測(cè)CYP1B1基因和MYOC基因的變異，作為正常對(duì)照。 結(jié)果：我們?cè)贑YP1B1基因的外顯子區(qū)域一共檢測(cè)出20種不同的突變，這些突變?cè)趯?duì)照人群中均沒(méi)有被發(fā)現(xiàn)。其中的6種已經(jīng)被以往的文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)，它們分別是：g．4449G>T、g．4397G>A、g．7927G>A、g．8006G>A、g．8168G>A、

3、g．8242C>T。另有14種均為本研究首次發(fā)現(xiàn)，它們分別是：g．3972delC、g．3985C>G、g．4089T>C、g．4124C>G、g4157C>T、g．4168_4169insGACCGGCCGGCCTTCGCC、g.4206T>C、g．4413A>G、g．4664G>A、g．4677A>G、g．4761A>G，g．7925T>A、g．7940G>T，g．8209 8213delAGCAGinsTTGTTGAAAAA。CY

4、P1B1基因的啟動(dòng)子區(qū)域的測(cè)序沒(méi)有發(fā)現(xiàn)突變。116例嬰幼兒型青光眼患者中共有20人具有CYP1B1基因的突變，其中5例呈現(xiàn)純合子，11例為雜合子，4例為混合雜合子，總頻率為17.2％(20/116)。此外，8個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)：g．2805C>T、g．3130C>T、g．3793T>C、g．3947C>G、g．4160G>T、g．8131C>G、g．8184C>T、g．8195A>G在病例和對(duì)照中的頻率相似，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。M

5、YOC基因的篩查結(jié)果顯示，有三位沒(méi)有CYP1B1基因突變的患者具有MYOC基因的三個(gè)新的突變：c．688G>A、c．814C>T和c．938C>T，它們?cè)趯?duì)照人群中都沒(méi)有被發(fā)現(xiàn)。同時(shí)在病例中還檢測(cè)到文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)的7種多態(tài)：c．34G>C、c．57G>T、c．136C>T、c．227G>A、c．369C>T、c．864C>T和c．1058C>T。這樣，MYOC在原發(fā)性嬰幼兒型青光眼患者中的突變率為2.6％(3/116)。 結(jié)論：本研

6、究揭示了我國(guó)漢族人群中的嬰幼兒型青光眼的CYP1B1基因和MYOC基因突變的種類和數(shù)量，部分的原發(fā)性嬰幼兒型青光眼的發(fā)病與CYP1B1基因的突變有關(guān)，而MYOC基因在此病患者中所起的作用較小。 第二部分：青少年型青光眼家系的候選基因篩查和基因定位 目的：旨在探究中國(guó)青少年型青光眼家系與MYOC基因突變的關(guān)系，利用大家系行基因定位，尋找青少年型青光眼的基因位點(diǎn)。 方法：收集12個(gè)漢族青少年型開(kāi)角型青光眼家系，抽取每

7、位家系成員少量的外周血，提取基因組DNA，使用PCR的方法擴(kuò)增MYOC基因的編碼外顯子區(qū)域，直接測(cè)序?qū)ふ彝蛔?。?duì)其中2個(gè)沒(méi)有MYOC突變的大家系使用連鎖分析的方法進(jìn)一步排除MYOC、OPTN、WDR36基因，再使用微衛(wèi)星標(biāo)記(STR)行全基因組掃描，通過(guò)連鎖分析和單倍型分析得到定位的區(qū)間。 結(jié)果：本研究共收集到12個(gè)青少年型青光眼家系，均呈常染色體顯性遺傳，他們發(fā)病年齡的中位數(shù)在 26y (19-32y)，治療前眼壓的中位數(shù)為

8、39mmHg(32.5-46.5mmHg)，在 MYOC 基因的篩查中發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)家系具有P370L (c．1109C>T)突變，一個(gè)家系具有。D380Y (c．1138G>T)突變，另有一個(gè)家系具有 T438I(c．1313C>T)突變。P370L (c．1109C>T)和 T438I(c．1313C>T)為已知突變，D380Y(c．1138G>T)則是本研究首次發(fā)現(xiàn)，在120份對(duì)照樣本的檢測(cè)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)攜帶者。其余的家系均未找到MYOC

9、基因的突變，總的突變頻率為33％(4/12)。使用連鎖分析的方法排除了兩個(gè)大家系的候選基因 MYOC、OPTN、WDR36，全基因組掃描、兩點(diǎn)連鎖分析和單倍型分析的結(jié)果顯示J4家系在3號(hào)染色體上存在連鎖，最大的LOD值存在于D3S1292(LODs=3.87，θ=0.00)處，初步定位于染色體的3p14-q26，D3S1566-D3S1565之間，約為88cM(102Mb)的區(qū)間，該區(qū)間完全包含了原先的CLC1C位點(diǎn)。而J8家系在2號(hào)染

10、色體上存在連鎖，最大LOD值存在于D2S337(LODs=5.06，θ=0.00)處，初步定位于染色體的2p14-21，D2S391-D2S2368之間，約為16cM(21Mb)的區(qū)間，也是完全包含了報(bào)道的GLC1H位點(diǎn)。 結(jié)論：約有1/3的青少年型開(kāi)角型青光眼家系是由MYOC基因的變異所引起的，在此類家系中行MYOC基因的檢測(cè)有助于早期診斷。CLC1C和GLC1H是兩個(gè)有希望的青少年型青光眼的候選位點(diǎn)，致病基因的確定有待進(jìn)一步