結(jié)直腸癌耐藥基因P-gp、Top-Ⅱ及ERCC1表達(dá)的臨床意義.pdf

1、目的:結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在一些歐美發(fā)達(dá)國(guó)家高居惡性腫瘤的首位，在我國(guó)由于人們生活方式及膳食結(jié)構(gòu)的改變，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害到國(guó)民的身體健康和生活質(zhì)量。目前對(duì)治療CRC主要方法是手術(shù)切除，結(jié)合輔助性化療、放療、免疫治療等綜合治療?；熑允悄壳爸匾闹委煼椒?，不論是接受過(guò)手術(shù)治療，還是失去手術(shù)機(jī)會(huì)的CRC患者幾乎都需要接受化療。然而，很多結(jié)直腸癌患者對(duì)化療藥物

2、反應(yīng)差，主要原因是腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性。腫瘤細(xì)胞的耐藥分為原發(fā)耐藥和繼發(fā)耐藥，前者是指腫瘤細(xì)胞沒(méi)進(jìn)行任何化療藥物即存在對(duì)化療藥物耐藥;后者是指腫瘤細(xì)胞原本對(duì)化療藥物敏感，化療后發(fā)生了耐藥。腫瘤細(xì)胞的耐藥常表現(xiàn)為多藥耐藥(multi-drug resistance，MDR)，腫瘤細(xì)胞在某一種藥物作用產(chǎn)生耐藥后，不僅對(duì)該藥耐藥，同時(shí)也對(duì)與這種藥物結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制不同的其他多種藥物耐藥的現(xiàn)象，是導(dǎo)致化療的失敗。因此在應(yīng)用化療藥物前，檢測(cè)細(xì)

3、胞的耐藥狀況非常必要。目前發(fā)現(xiàn)的耐藥譜系明確的耐藥基因已有11種，可分為藥泵蛋白、藥物代謝酶類(lèi)、DNA修復(fù)酶、蛋白質(zhì)合成限速酶等。MDR-1基因編碼的P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是藥泵蛋白的重要代表之一，其相對(duì)分子質(zhì)量為170 KD。在ATP的參與下可與多種藥物結(jié)合，以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的方式將擴(kuò)散入細(xì)胞的脂溶性藥物泵出細(xì)胞，減少藥物在細(xì)胞內(nèi)的蓄積，使細(xì)胞對(duì)藥物耐受，并對(duì)不同脂溶性類(lèi)藥物產(chǎn)生交叉耐藥。DNA修復(fù)酶中研究較多

4、的是為拓?fù)洚悩?gòu)酶(TopoisomeraseⅡ)和核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)因子1(excision repair cross-complementing1，ERCC1)。TOP-Ⅱ是調(diào)節(jié)核酸空間結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化和控制核酸生理功能的關(guān)鍵酶，參與DNA修復(fù)、轉(zhuǎn)錄和分離，是多種化療藥物作用的重要靶點(diǎn)，其表達(dá)下調(diào)或活性降低是藥物失去作用靶點(diǎn)，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥。ERCC1是核苷酸切除修復(fù)（nucleotide excision repari，NER

5、）活性的標(biāo)志性基因，也是細(xì)胞存活必須的DNA修復(fù)基因，研究顯示在未手術(shù)或化療前ERCC1高表達(dá)結(jié)直腸癌易產(chǎn)生對(duì)鉑類(lèi)化療藥物的耐藥，可作為指導(dǎo)預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)[29]。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了Pgp、TOP-Ⅱ及ERCC1蛋白在結(jié)直腸癌和正常大腸粘膜的表達(dá)情況，分析了其表達(dá)與腫瘤分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系，為臨床治療結(jié)直腸癌制定合理化療發(fā)案及預(yù)后判斷提供理論依據(jù)。
　　方法:收集結(jié)直腸癌標(biāo)本80例，高分化腺癌19

6、例，中分化腺癌50例，低分化腺癌11例，正常大腸粘膜10例，患者年齡39-89歲，平均年齡63.7歲;男性53例，女性27例。免疫組化的方法檢測(cè)結(jié)直腸癌癌細(xì)胞P-gp、Topo-Ⅱ及ERCC1的表達(dá)狀況，分析PgP、Topo-Ⅱ及ERCC1表達(dá)與臨床病理參數(shù)間關(guān)系，探討利用部分臨床病例理參數(shù)推測(cè)腫瘤原發(fā)性耐藥狀態(tài)的可能性，結(jié)果均以P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)具有顯著意義。
　　結(jié)果:P-gp陽(yáng)性表達(dá)率在結(jié)直腸癌與正常大腸粘膜分別為83.7

7、5％(67/80)與50％(5/10)，癌顯著高于正常大腸粘膜(P=0.012＜0.05);在低分化腺癌、中分化腺癌與高分化腺癌分別為90.91％(10/11)、90.00％(45/50)與63.15％(12/19)，中、低分化腺癌顯著高于高分化腺癌(P=0.021＜0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N1與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N0期分別為94.12％(32/34)與76.09％(35/46)(P=0.031＜0.05); P-gp蛋白表達(dá)率與患者性別、年

8、齡、TNM分期、腫瘤生長(zhǎng)部位及腸壁浸潤(rùn)深度之間均無(wú)明確相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。
　　TOP-Ⅱ陽(yáng)性表達(dá)率在結(jié)直腸癌組織與正常大腸粘膜分別為18.75％(15/80)與40％(4/10)(P=0.121＞0.05); TOP-Ⅱ陽(yáng)性表達(dá)率在低分化腺癌、中分化腺癌與高分化腺癌分別為9.09％(1/11)、12％(6/50)與42.11％(8/19)，中、低分化腺癌顯著低于高分化腺癌(P=0.011＜0.05); TOP-Ⅱ蛋白表達(dá)與

9、患者的性別、年齡、TNM分期及腫瘤的生長(zhǎng)部位、腸壁浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)明確相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。
　　ERCC1陽(yáng)性表達(dá)率在結(jié)直腸癌組織與正常大腸粘膜分別為53.75％(43/80)與10％(1/10)，癌組織顯著高于正常大腸粘膜(P=0.009＜0.05);在低分化腺癌、中分化腺癌與高分化腺癌分別為18.18％(2/11)、52.00％(26/50)與78.95％(15/19)，低分化腺癌顯著低于中分化、高分化腺癌(P=

10、0.005＜0.05);在臨床分期Ⅲ+Ⅳ期、Ⅱ期與Ⅰ期分別為37.80％(14/37)、60.00％(18/30)與84.6％(11/13)，Ⅲ+Ⅳ期、Ⅱ期均顯著低于Ⅰ期(P＜0.05); ERCC1蛋白表達(dá)與患者性別、年齡和腫瘤生長(zhǎng)部位、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)明確相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1.低分化腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌P-gp陽(yáng)性表達(dá)率較高，預(yù)示P-gp表達(dá)可能成為預(yù)后不良的標(biāo)志;
　　2.部分低分化腺癌