唑來膦酸和阿侖膦酸鈉預防兔激素性股骨頭缺血性壞死的實驗研究.pdf

1、激素性股骨頭壞死發(fā)病機制的假說有很多,其中骨質疏松學說認為大劑量激素可以促進破骨細胞的分化和成熟,并可引起成骨細胞和骨細胞的凋亡,導致骨質疏松,造成局部骨組織強度的下降,容易發(fā)生股骨頭骨小梁微骨折,這些微骨折的累積,導致最后的股骨頭壞死甚至塌陷。二膦酸鹽是一種破骨細胞抑制劑,抑制破骨細胞的骨吸收作用,可有效的治療骨質疏松,其能否預防激素性股骨頭壞死的發(fā)生,從分子和蛋白水平進行研究是本實驗的目的。
　　目的：通過制造兔激素性股骨頭壞

2、死模型,使用阿侖膦酸鈉和唑來膦酸進行干預,觀察阿侖膦酸鈉和唑來膦酸能否預防激素性股骨頭壞死,并比較不同藥物的作用強弱,同時對其作用機制進行研究。
　　方法：健康28周齡新西蘭大白兔90只,體重(3.8±0.3kg),雌雄不限。隨機分為陽性對照組(Group A);阿侖膦酸鈉組(Group B);唑來膦酸組(Group C),各30只。各組動物均以標準飼料實驗性喂養(yǎng)1周后,3組均經耳緣靜脈注射10μg/kg大腸桿菌內毒素,24h后于

3、臀肌注射20mg/kg甲基強的松龍,共3次,每次間隔24h;B組在使用激素的同時給予阿侖膦酸鈉150μg/kg/d,共45次,頸部皮下注射;C組在使用激素的同時給予唑來膦酸100μg/kg,共2次,每次間隔4周,耳緣靜脈注射。注射后觀察動物一般情況,激素末次注射后6周后行雙髖 X線片檢查,觀察股骨頭影像及形態(tài)學改變;攝片后取雙側兔股骨頭骨組織,沿正中矢狀面剖為兩半,一半行組織病理學檢查,石蠟包埋、切片,HE染色,計算空骨陷窩率,鑒定股骨

4、頭壞死情況。另一半股骨頭骨組織再剖為兩半,一半提取總RNA,采用實時定量聚合酶鏈反應(RTQ-PCR)技術檢測OPG mRNA和RANKL mRNA的表達水平并計算OPG/RANKL比值;一半提取骨蛋白,采用蛋白質免疫印跡法(Western blot)測出OPG和RANKL蛋白表達量,并計算OPG/RANKL比值。
　　結果：A、B、C三組動物死亡率分別為16.67％(5/30)、13.33%(4/30)、10%(3/30);HE

5、染色觀察股骨頭壞死率分別為76.0%(19/25)、30.77%(8/26)、7.41%(2/27),B、C組股骨頭壞死率低于A組,C組壞死率低于B組(P<0.05);空骨陷窩率(%)分別為26.33±1.17、20.85±1.47、18.55±2.43;B、C組空骨陷窩率低于A組,C組空骨陷窩率低于B組(P<0.05)。A、B、C三組動物股骨頭骨組織RTQ-PCR檢測OPG mRNA分別為0.85±0.086、1.22±0.085、1

6、.62±0.097,RANKL mRNA分別為3.23±0.78、2.84±0.95、1.43±0.93,OPG/RANKL分別為0.26±0.02、0.43±0.02、1.12±0.02,B、C兩組的RANKL mRNA低于A組(P<0.001),B組和C組相比,C組低于B組(P<0.001);B、C兩組的OPG mRNA及OPG/RANKL高于A組(P<0.001),B組和C組相比,C組高于B組(P<0.001)。A、B、C三組動物

7、股骨頭骨組織Western Blot檢測OPG蛋白表達量分別為0.48±0.09、0.54±0.09、0.74±0.08,RANKL蛋白表達量分別為1.51±0.10、1.23±0.08、0.63±0.08,OPG/RANKL分別為0.32±0.04、0.44±0.05、1.19±0.06,B、C兩組的RANKL蛋白表達量低于A組(P<0.001),B組和C組相比,C組低于B組(P<0.001);B、C兩組的OPG蛋白表達量及OPG/R

8、ANKL高于A組(P<0.05),B組和C組相比,C組高于B組(P<0.001)。
　　結論：1.單次低劑量內毒素聯(lián)合3次大劑量甲基強的松龍能成功誘導早期ANFH模型的建立;2.唑來膦酸和阿侖膦酸鈉能夠有效預防兔激素性股骨頭壞死的發(fā)生,與阿侖膦酸鈉相比唑來膦酸的效果更好;3.唑來膦酸和阿侖膦酸鈉預防激素性股骨頭壞死的作用,其機理之一為針對股骨頭內骨組織,上調OPG和下調RANKL mRNA及蛋白表達,進而增加OPG/RANKL表達