羥基紅花黃色素A促進兔激素性股骨頭缺血性壞死修復機制的研究.pdf

1、目的:
　　觀察活血化瘀中藥紅花主要有效成分羥基紅花黃色素A對激素誘導兔股骨頭缺血性壞死的修復作用，從MAPK信號通路探討其作用機制，為防治激素性股骨頭缺血性壞死提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用賀氏造模法，通過對新西蘭兔臀肌注射醋酸潑尼松龍建立兔激素性股骨頭缺血性壞死模型，并通過透射電鏡觀察、組織形態(tài)學觀察、空骨陷窩率計算等方面進行鑒定。
　　2.造模成功后，將實驗動物隨機分為5組，分別采用不同方法進行干

2、預。空白組:正常飼料喂養(yǎng);對照組A:髓芯減壓+生理鹽水50μl局部注射;對照組B:耳緣靜脈注射生理鹽水2ml/d;治療組A:髓芯減壓+羥基紅花黃色素A50μl局部注射;治療組B:耳緣靜脈注射羥基紅花黃色素A2ml/d。
　　3.上述5組動物于干預2周后取出股骨頭，行透射電鏡、組織形態(tài)學觀察、空骨陷窩率計算、ALP檢測、PCR法檢測Ⅰ型膠原表達、免疫組化法檢測MAPK信號通路JNK的表達、Westernblot法對MAPK信號通路相

3、關蛋白ERK1、ERK2、P38的表達進行分析檢測。
　　結果:
　　1.光鏡觀察:空白組股骨頭軟骨層較厚，成骨活躍，骨小梁排列較規(guī)則，骨細胞清晰可見，核較大，多位于中央，偶見骨陷窩空虛，髓腔內(nèi)可見增生活躍的骨髓組織。對照組股骨頭軟骨層較薄，軟骨下骨小梁變細，結構紊亂，部分有斷裂現(xiàn)象，骨陷窩空虛現(xiàn)象明顯增多，骨細胞減少，脂肪細胞增多，且髓腔幾乎完全為脂肪組織代替。治療組股骨頭軟骨層明顯增厚，軟骨下骨小梁變粗，排列較規(guī)則，骨細

4、胞增生活躍，核大居中，脂肪細胞減少、變小，骨陷窩空虛現(xiàn)象明顯減少，髓腔內(nèi)可見增生活躍的骨髓組織逐漸取代脂肪組織。
　　2.電鏡超微結構觀察:空白組骨細胞形態(tài)基本正常，胞內(nèi)細胞器比較完整，胞漿豐富，未見明顯脂滴;對照組骨細胞結構模糊不清，數(shù)量減少，多發(fā)生退變壞死，胞核固縮，骨細胞內(nèi)有大小不等、多少不一的脂滴出現(xiàn)，胞核被擠向一側;治療組骨組織表面有一層梭形成骨細胞覆蓋，骨細胞細小，核仁可見，漿少，有少量線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體，個別

5、骨細胞結構模糊不清，細胞內(nèi)脂滴明顯減少或消失。
　　3.空骨陷窩率計算:空白組空骨陷窩率較低，為14.38％;對照組空骨陷窩率明顯增高，A高達26.43％、B高達25.47％;治療組空骨陷窩率與對照組相比明顯降低，A為14.63％、B為16.32％。
　　4.ALP檢測:對照組比空白組ALP含量明顯降低，而羥基紅花黃色素A治療組比對照組含量明顯升高，且治療組中A與B相比有差異。與對照組A、B相比，治療組A、B的ALP含量均有

6、明顯升高。
　　5.RT-PCR檢測:對照組比空白組Ⅰ型膠原表達均有明顯下調(diào)，而羥基紅花黃色素A治療組比對照組Ⅰ型膠原表達均有明顯升高，且治療組中A與B相比無顯著差異。與對照組A、B相比，治療組A、B的Ⅰ型膠原表達均有明顯升高。
　　6.免疫組化:對照組、治療組JNK表達比空白組均有上調(diào)，而對照組上調(diào)更加明顯。治療組與對照組相比JNK表達均有顯著降低。
　　7.MAPK信號轉(zhuǎn)導相關蛋白表達:通過Westernblot法

7、對MAPK信號通路相關蛋白ERK1、ERK2、P38的表達進行分析檢測，發(fā)現(xiàn)對照組與空白組相比，P-ERK1、P-ERK2的表達明顯下調(diào)，而P-P38的表達則明顯上升。治療組與對照組相比，P-ERK1、P-ERK2的表達均明顯上升，而P-P38的表達則明顯下降。同時P-ERK1、P-ERK2的表達在治療組A、B之間差異顯著，而P-P38蛋白表達差異不明顯。
　　結論:
　　1.通過對股骨頭組織進行透射電鏡、組織形態(tài)學觀察、空

8、骨陷窩率計算、ALP檢測、以及Ⅰ型膠原表達的檢測，表明羥基紅花黃色素A可促進BMSCs的成骨分化，有利于壞死股骨頭骨組織的修復。
　　2.通過實驗發(fā)現(xiàn)髓芯減壓聯(lián)合局部注射HSYA比單純耳緣靜脈注射HSYA對壞死股骨頭的修復作用更強，表明兩者聯(lián)合治療激素性股骨頭缺血性壞死可能與通過減輕骨內(nèi)壓，改善局部血液循環(huán)同時通過活血化瘀，促進BMSCs的成骨分化，加快破損骨組織修復有關。
　　3.羥基紅花黃色素A對激素性股骨頭缺血性壞死的