2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過建立真皮下毛細(xì)血管網(wǎng)皮片移植模型,建立骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)培養(yǎng)的方法,觀察自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)真皮下毛細(xì)血管網(wǎng)皮片的存活影響。
  方法:
  1、豬BMSCs原代培養(yǎng)、傳代、純化。將小豬腹腔麻醉后,無菌抽取骨髓,通過梯度離心法分離,獲得骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,接種于含有培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。3d后除去非貼壁細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)及生長情況,待細(xì)胞鋪滿后進(jìn)行傳代。取3代后的細(xì)胞備用。
  2、BMSC

2、s的CM-DiI標(biāo)記。取第三代BMSCs,進(jìn)行DiI熒光標(biāo)記,將標(biāo)記后的BMSCs消化重懸,調(diào)節(jié)濃度備用。
  3、真皮下毛細(xì)血管網(wǎng)皮片移植動物模型的建立。將小豬麻醉后,在背部兩側(cè)分別移植自體的真皮下毛細(xì)血管網(wǎng)皮片,一側(cè)注射鹽水,一側(cè)注射標(biāo)記過DiI熒光的BMSCs。術(shù)后兩周觀察皮片中熒光細(xì)胞的表達(dá)、皮片存活的面積及病理變化。
  結(jié)果:
  1、MSC體外分離、培養(yǎng)、純化及形態(tài)觀察。倒置相差顯微鏡下觀察剛接種的骨髓中

3、體積較大的單核細(xì)胞呈球形,懸浮于培養(yǎng)液中。48 h少數(shù)細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣外形,以后細(xì)胞呈克隆樣生長。3~4 d開始迅速生長,待細(xì)胞達(dá)到單層匯合的80%~90%,細(xì)胞呈比較均一的梭形,成纖維樣細(xì)胞樣生長,形成旋渦狀。
  2、 BMSCs的CM-DiI標(biāo)記。CM-DiI熒光染料染色后細(xì)胞大部分著色,染色后的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)后,保持良好的細(xì)胞形態(tài)。
  3、真皮下毛細(xì)血管網(wǎng)皮片移植動物模型的建立。兩周后觀察到MSC組較鹽水組存活較好

4、,大部分存活,存活面積也較大。快速冰凍切片觀察,MSC組發(fā)現(xiàn)切片中具有大量紅色熒光細(xì)胞,注射點(diǎn)有更多熒光細(xì)胞聚集,血管內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)紅色熒光,皮片組織病理學(xué)觀察,MSC組血管增生明顯,數(shù)量較多,多于鹽水組。
  結(jié)論:
  1、密度梯度離心法和貼壁篩選法相結(jié)合來分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法較為簡單方便;
  2、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠提高真皮下毛細(xì)血管網(wǎng)皮片的存活面積;
  3、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠促進(jìn)真皮下毛細(xì)血

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