成年與幼年豬半月板損傷愈合的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察成年與幼年豬半月板在體外器官培養(yǎng)條件下各自的變化特點(diǎn),探討成年及幼年豬半月板損傷后內(nèi)在愈合能力的差異。
　　方法:選取6月齡成年豬和1月齡幼年豬的半月板作為研究對(duì)象。從每個(gè)成年豬半月板切取寬約8mm大小的標(biāo)本2個(gè),隨機(jī)分為a組和A組,每組16個(gè)標(biāo)本。從每個(gè)幼年豬半月板切取寬約8mm大小的標(biāo)本2個(gè),隨機(jī)分為b組和B組,每組16個(gè)標(biāo)本。a組和b組標(biāo)本不做任何處理;A組和B組標(biāo)本中央中內(nèi)1/3交界處造長(zhǎng)約4mm的全層縱裂損傷。

2、將制作好的標(biāo)本放入六孔培養(yǎng)板內(nèi),每孔內(nèi)含1個(gè)成年豬半月板標(biāo)本與1個(gè)幼年豬半月板標(biāo)本。然后進(jìn)行體外器官培養(yǎng)。a組和b組分別于培養(yǎng)0、2、4、6周后每組隨機(jī)取出4個(gè)標(biāo)本行組織學(xué)檢查,HE染色:在半月板內(nèi)側(cè)1/3區(qū)域隨機(jī)觀察3個(gè)高倍視野(10×40倍),計(jì)數(shù)每個(gè)視野的細(xì)胞數(shù),比較在各時(shí)間點(diǎn)兩組間的差異及每組在各時(shí)間點(diǎn)間的差異;番紅O染色:在半月板內(nèi)側(cè)1/3區(qū)域隨機(jī)觀察3個(gè)高倍視野(10×40倍),觀察每個(gè)視野的染色程度,半定量評(píng)分,比較在各時(shí)

3、間點(diǎn)兩組間的差異及每組在各時(shí)間點(diǎn)間的差異。A組和B組分別于培養(yǎng)0、2、4、6周后每組隨機(jī)取4個(gè)標(biāo)本行HE染色,觀察縱裂界面愈合情況,半定量評(píng)分,比較在各時(shí)間點(diǎn)兩組間的差異及每組在各時(shí)間點(diǎn)間的差異。
　　結(jié)果:隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),半月板標(biāo)本光澤及彈性均逐漸降低。A組標(biāo)本從大體觀察在培養(yǎng)的6周內(nèi),裂隙始終未愈合;B組標(biāo)本在培養(yǎng)2周后,裂隙大小無明顯改變,4周后,部分標(biāo)本裂隙縮小,但仍未閉合,6周后,大部分標(biāo)本裂隙愈合。正常幼年半月板纖

4、維軟骨細(xì)胞密度明顯高于正常成年半月板,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),成年與幼年半月板的纖維軟骨細(xì)胞數(shù)量均逐漸減少,細(xì)胞體積變小,部分胞核收縮變形。培養(yǎng)0、2、4、6周后,a組每高倍視野的細(xì)胞密度分別為(45.9±7.4)、(25.7±3.4)、(16.7±3.2)、(7.7±2.2),b組每高倍視野的細(xì)胞密度分別為(291.4±19.1)、(191.6±12.9)、(136.8±10.7)、(96.2±11.2),在各時(shí)間點(diǎn)兩組間比較均有顯著性差

5、異(P<0.01),每組在不同時(shí)間點(diǎn)間的比較均有顯著性差異(P<0.01)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),成年與幼年半月板番紅O染色程度都逐漸變淡。培養(yǎng)0、2、4、6周后,a組番紅O染色半定量評(píng)分分別為(1.8±0.4)、(1.3±0.7)、(0.8±0.6)、(0.3±0.5), b組評(píng)分分別為(2.0±0.0)、(1.4±0.7)、(0.8±0.6)、(0.3±0.5),在各時(shí)間點(diǎn)兩組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),每組在不同時(shí)間點(diǎn)間比

6、較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。組織學(xué)觀察,成年組,除有1個(gè)標(biāo)本在培養(yǎng)6周后有很少量修復(fù)組織產(chǎn)生外,其余標(biāo)本在各時(shí)間點(diǎn)均無明顯修復(fù)組織產(chǎn)生;幼年組,培養(yǎng)2周后部分標(biāo)本已有少量修復(fù)組織產(chǎn)生,4周后部分標(biāo)本出現(xiàn)橋接,但仍有裂隙存在,6周后大部分標(biāo)本裂隙消失、缺損完全被修復(fù)組織填充。體外培養(yǎng)0、2、4、6周后,A組縱裂界面愈合半定量評(píng)分分別為(0.0±0.0)、(0.0±0.0)、(0.0±0.0)、(0.3±0.5), B組評(píng)分分別為(0.

7、0±0.0)、(0.5±0.6)、(1.3±0.5)、(2.8±0.5)。0周、2周時(shí),A組與B組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);4周、6周時(shí), A組與B組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)。A組在各時(shí)間點(diǎn)間的比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。B組中,0周與2周、2周與4周比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);0周與4周、0周與6周、2周與6周、4周與6周比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:體外器官培養(yǎng)條件下幼年