核酸探針電化學(xué)傳感技術(shù)用于酶活性和腺苷檢測(cè)的研究.pdf

1、電化學(xué)生物傳感器,具有易于實(shí)現(xiàn)微型化、集成化、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),在化學(xué)、生物學(xué)基礎(chǔ)研究、臨床檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。核酸探針能夠與多種目標(biāo)物特異性結(jié)合,形成多種靈活的分子識(shí)別和信號(hào)轉(zhuǎn)換機(jī)制。本論文基于核酸探針的特點(diǎn),針對(duì)酶和生物小分子的檢測(cè),發(fā)展簡(jiǎn)便、快速、靈敏的電化學(xué)傳感器,具體完成了以下研究工作:
　　 1.二茂鐵核酸探針的合成及電化學(xué)表征
　　 對(duì)琥珀酰亞胺偶聯(lián)方法進(jìn)行改進(jìn),盡量消除水對(duì)反應(yīng)體系中

2、活性中間體的影響,并采用高效液相色譜(HPLC)純化,得到了二茂鐵標(biāo)記的核酸探針。電化學(xué)測(cè)量證明二茂鐵已成功標(biāo)記到3’為NH2的核酸探針上。相比于一般的采用透析分離純化二茂鐵核酸探針的方法,HPLC分離純化的二茂鐵核酸探針具有純度高、信號(hào)強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。為下一步的工作打下了基礎(chǔ)。
　　 2.二茂鐵核酸探針用于APE1酶活性的電化學(xué)檢測(cè)
　　 APE1酶是一種重要的DNA損傷修復(fù)蛋白,經(jīng)典的放射性標(biāo)記活性分析雖然靈敏度高,但存在

3、操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、有放射性污染等缺陷。我們?cè)趲в蠥P位點(diǎn)的核酸探針上修飾二茂鐵,并與固定在金電極表面的捕獲探針雜交,形成帶AP位點(diǎn)的二茂鐵修飾的雙鏈DNA。利用APE1酶對(duì)AP位點(diǎn)切割產(chǎn)生的信號(hào)變化實(shí)現(xiàn)了酶活性的電化學(xué)檢測(cè)。該方法對(duì)APE1酶活性的檢測(cè)范圍是0.02—2 U/ml,檢測(cè)下限為0.02U/ml,具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),有望用于生物樣品中DNA損傷修復(fù)的研究。
　　 3.“裂開(kāi)型”核酸適體結(jié)合金納米顆粒信號(hào)放大用