基于尿液代謝組學(xué)的脾氣虛證本質(zhì)研究.pdf

1、目的：脾氣虛證實(shí)質(zhì)研究是證本質(zhì)研究的一項(xiàng)重要內(nèi)容。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為脾氣不足，運(yùn)化功能失常，津液不能布散而停滯體內(nèi)，可產(chǎn)生濕、痰、飲等病理產(chǎn)物，從而引發(fā)各種不同的疾病，故有“內(nèi)傷脾胃，百病由生”“脾為生痰之源”之說?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為中醫(yī)脾是一個(gè)多系統(tǒng)、多器官的功能單位，它是以消化系統(tǒng)為基礎(chǔ)的，包括能量代謝和水液代謝，并與血液、內(nèi)分泌、免疫和神經(jīng)系統(tǒng)等有密切聯(lián)系的一個(gè)概念。代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）是以中心性肥胖為中心，

2、涉及多種代謝異常包括血壓、血糖、血脂，與心血管疾病緊密聯(lián)系的疾病狀態(tài)，其病因?qū)W主要以肥胖為核心，痰濕是肥胖的重要病理因素，而MS以肥胖為中心，可以說痰濕是貫穿MS的主要證候群的中心病理因素。由此可見，脾虛失運(yùn)脾不散精是MS發(fā)生的重要病機(jī)。因此代謝綜合征的發(fā)病，與脾的功能密不可分。代謝組學(xué)是一門新興科學(xué)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，它通過核磁共振（NMR）、色譜（GC）、質(zhì)譜（MS）等現(xiàn)代儀器分析手段，定性或定量研究生物體液或組織中的小分子代謝產(chǎn)

3、物，系統(tǒng)地揭示疾病過程中的生理病理狀態(tài)，而這種系統(tǒng)性正與中醫(yī)學(xué)的整體觀相吻合。目前代謝組學(xué)已經(jīng)作為一種新的技術(shù)應(yīng)用于研究臨床疾病的診斷。本研究運(yùn)用病證結(jié)合手段，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）技術(shù)的代謝組學(xué)方法，以代謝綜合征為基礎(chǔ)病探討其脾氣虛患者尿液中小分子代謝組成分。挖掘代謝組變化模式或特征峰，通過綜合集成分析，嘗試對(duì)中醫(yī)脾氣虛證的診斷或評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行定性、定量的表達(dá)。從而進(jìn)一步揭示脾氣虛證的代謝產(chǎn)物特征，揭示中醫(yī)脾本質(zhì)的現(xiàn)代研究

4、指標(biāo)。 方法：病例來源于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第醫(yī)二院體檢中心，年齡40-60歲的體檢人員。采用2005年4月國(guó)際糖尿病聯(lián)盟（IDF）頒布的代謝綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)，2002年《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》的脾氣虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)將人員分成3組即代謝綜合征脾氣虛組、代謝綜合征組及正常組。將入選人員晨尿或二次晨尿1ml由-20℃保存一周后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱備用。運(yùn)用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS）聯(lián)用技術(shù)分析尿液成分

5、，采用偏最小二乘．判別分析法（PLS-DA）對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。并且對(duì)表達(dá)差異的尿液代謝產(chǎn)物定性。 結(jié)果：經(jīng)代謝組學(xué)分析后，PLS-DA模式圖顯示每?jī)山M間尿液中的代謝輪廓都有良好的區(qū)分，并得出相應(yīng)的潛在標(biāo)志物即：代謝綜合征尿液中保留時(shí)間為10．0895出現(xiàn)的分子量為130．048的未知化合物和310．198的肉堿相對(duì)正常組濃度減低；代謝綜合征脾氣虛組尿液中1．1242時(shí)出現(xiàn)的分子量為229．137的leucylproline較代謝綜

6、合征組和正常組均明顯升高，而5．7365時(shí)出現(xiàn)的分子量為265．115的苯乙酰谷氨酰胺較代謝綜合征組和正常組均明顯降低。 結(jié)論： 1．脾氣虛代謝綜合征組與代謝綜合征組和正常對(duì)照組尿液代謝輪廓均有良好區(qū)分。 2．發(fā)現(xiàn)了一些脾氣虛證的潛在標(biāo)記物，如leucylproline和苯乙酰谷氨酰胺。有助于脾氣虛證臨床微觀指標(biāo)的診斷，對(duì)中醫(yī)脾氣虛證的量化起了一定的規(guī)范作用。 3．代謝組學(xué)技術(shù)的系統(tǒng)性與中醫(yī)的整體觀念相似