基于代謝組學(xué)的冠心病心絞痛痰濁證、血瘀證研究.pdf

1、研究背景:
　　 作為目前我國(guó)國(guó)民首位致死因?yàn)榈男难芗膊∈且环N與代謝過(guò)程密切相關(guān)的復(fù)雜疾病,發(fā)病率和死亡率依然呈上升趨勢(shì)。其發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體在代謝過(guò)程中引起的體液和組織中代謝產(chǎn)物的變異及表達(dá)異常有關(guān)。辨證論治是中醫(yī)學(xué)的主要特色,整個(gè)診斷、治療、處方、用藥都是以證為核心展開(kāi)的。中醫(yī)學(xué)診治冠心病的切入點(diǎn)即證候。代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等之后發(fā)展起來(lái)的以探討機(jī)體整體代謝狀態(tài)為目標(biāo)的新方法。疾病引起的機(jī)體代謝水平紊亂往往會(huì)在尿

2、液和血液等體液的代謝組得到表現(xiàn)。對(duì)尿液和血液等體液代謝組進(jìn)行檢測(cè)和分析,就有可能對(duì)疾病發(fā)生和發(fā)展過(guò)程伴隨的生物化學(xué)變化進(jìn)行了解和認(rèn)識(shí),有可能發(fā)現(xiàn)相關(guān)疾病發(fā)生的早期代謝組標(biāo)志物簇并認(rèn)識(shí)相關(guān)的病理發(fā)生的分子機(jī)理,有可能對(duì)疾病在其早期,甚至發(fā)生之前進(jìn)行診斷。
　　 研究目的:
　　 本研究利用代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)冠心病心絞痛痰濁證、血瘀證的血液、尿液對(duì)比分析和氣滯血瘀證、心血瘀阻證、氣虛血瘀證三種血瘀證進(jìn)行了初步研究,試圖通過(guò)患者血

3、液、尿液代謝物質(zhì)的變化探索病證模式背后的生物標(biāo)記物,為冠心病心絞痛痰濁證和血瘀證本質(zhì)的系統(tǒng)研究提供科學(xué)依據(jù)。建立病癥結(jié)合的代謝組學(xué)研究技術(shù)平臺(tái),為從代謝物水平探討中醫(yī)證本質(zhì)提供思路和方法。
　　 研究方法:
　　 1、冠心病心絞痛痰濁證、血瘀證患者的血漿代謝組學(xué)研究:對(duì)10例冠心病心絞痛痰濁證患者和10例冠心病心絞痛血瘀證患者的血漿樣本進(jìn)行氫核磁共振(1H NMR)檢測(cè)。通過(guò)偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)方法研究冠

4、心病心絞痛痰濁證患者與血瘀證患者之間血漿代謝產(chǎn)物譜的差異。
　　 2、冠心病心絞痛痰濁證、血瘀證的尿液代謝組學(xué)研究:對(duì)10例冠心病心絞痛痰濁證患者和10例冠心病心絞痛血瘀證患者的尿液樣本進(jìn)行氫核磁共振(1H NMR)檢測(cè)。通過(guò)偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)研究冠心病心絞痛痰濁證患者與血瘀證患者之間尿液代謝產(chǎn)物譜的差異。
　　 3、冠心病心絞痛三種血瘀證的血漿代謝組學(xué)研究:對(duì)18例健康人、18例冠心病心絞痛血瘀證患者

5、(6例氣滯血瘀證、6例心血瘀阻證、6例氣虛血瘀證)的血漿樣本進(jìn)行氫核磁共振(1H NMR)檢測(cè)。通過(guò)偏最小二乘判別分析(PLS-DA)方法研究各組之間的血漿代謝產(chǎn)物譜差異。
　　 結(jié)果:
　　 冠心病心絞痛痰濁證患者與冠心病心絞痛血瘀證患者血清能夠被區(qū)分,二組血漿代謝物含量存在明顯差異。痰濁證組血漿中低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、脂類化合物、酮體、乳酸、葡萄糖、N-乙酰糖蛋白、門冬氨酸、異亮氨酸、谷氨酞胺、肌醇的含量高于

6、血瘀證組,而高密度脂蛋白與不飽和脂肪酸、丙氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸的含量低于血瘀證組。
　　 冠心病心絞痛痰濁證患者與冠心病心絞痛血瘀證患者兩組尿液核磁共振氫譜的PLS-DA結(jié)果顯示,冠心病心絞痛痰濁證患者與冠心病心絞痛血瘀證患者能夠被區(qū)分,二組尿液樣本之間的代謝物含量存在明顯差異。冠心病心絞痛痰濁證組尿液中檸檬酸、α-酮戊二酸、順式-烏頭酸、葡萄糖、3-羥基丁酸、丙酮、酪氨酸、肌酐、氧化三甲胺、二甲胺、馬尿酸的含量高于血瘀

7、證組,而膽汁酸、組氨酸的含量低于血瘀證組。
　　 冠心病心絞痛三種血瘀證的血漿代謝組學(xué)的PLS-DA結(jié)果示,與健康人相比,心絞痛血瘀證患者血漿檸檬酸、琥珀酸、葡萄糖、乙酰糖蛋白、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、3-羥基丁酸、谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸含量較高,高密度脂蛋白、不飽和脂肪酸、蘇氨酸、組氨酸含量較低。氣虛血瘀證組與其他兩個(gè)血瘀證組差別較大,而氣滯血瘀證與心血瘀阻證差別不明顯。與其他血瘀證相比,氣虛血瘀證組血漿檸檬酸、3-羥基

8、丁酸、丙酮、氧化三甲胺含量較高,葡萄糖、N-乙酰糖蛋白、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、亮氨酸含量較低。
　　 結(jié)論:
　　 各分組血液、尿液樣本的1H NMR代謝譜存在差異,能從代謝組學(xué)分析中找出特異的標(biāo)志性代謝產(chǎn)物。利用代謝組學(xué)方法能區(qū)分不同證型的冠心病心絞痛患者的血漿1H-NMR圖譜,能確定痰濁證、血瘀證之間存在明顯差異的代謝產(chǎn)物。尿液代謝物變化能在一定程度上區(qū)分冠心病心絞痛的不同中醫(yī)證型。代謝組學(xué)研究的優(yōu)勢(shì)在于樣品獲取

9、更加方便、檢測(cè)更加容易。它能夠?qū)z測(cè)到的小分子化合物進(jìn)行定性和定量研究,而這些化合物的上調(diào)、下調(diào)或許將來(lái)可以用于中醫(yī)證候鑒別的客觀指標(biāo)。祖國(guó)醫(yī)學(xué)和代謝組學(xué)均是對(duì)影響機(jī)體整體狀況的多因素的研究對(duì)機(jī)體某一病理變化的全面情況進(jìn)行探究。二者之間理論上的關(guān)聯(lián)以及本研究的結(jié)果,為中醫(yī)辨證分型客觀化研究提供了新思路,為揭示中醫(yī)學(xué)證的木質(zhì)提供了新方法。
　　 健康人與冠心病心絞痛血瘀證患者的血漿1H-NMR圖譜可以區(qū)分,能確定差異代謝物；心絞痛