喜泊分聯(lián)合放療對上鼠H22移植瘤的作用及其放射增敏的研究.pdf

1、目的:原發(fā)性肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高的地區(qū)是亞洲和非洲東南部的一些國家。在我國肝癌發(fā)病率排名為第2位，僅次于肺癌。當前統(tǒng)計我國原發(fā)性肝癌患者人數(shù)占全世界發(fā)病總數(shù)的55％，死亡人數(shù)全世界原發(fā)性肝癌死亡人數(shù)的45％。肝切除術被認為是唯一根治原發(fā)性肝癌的治療方式，但由于該病發(fā)病比較隱匿，并且進展迅速的病情特點，多數(shù)患者在就診時已達到不能進行手術治療的晚期。目前，原發(fā)性肝

2、癌的非手術治療包括肝動脈栓塞化療術(TACE)、射頻消融術(RFA)、經皮酒精注射(PEI)、放射治療(RT)及靶向藥物治療等方法。國內外已有大量基礎及臨床試驗證明放射治療已然成為肝癌一種重要的治療手段。但受到放射性肝損傷及肝臟對放射線耐受性差的限制，對比放射劑量與腫瘤控制和正常組織損傷的曲線，若要提高放療效果，不能無限的增加放射劑量。放療增敏劑能夠通過增強放射線對腫瘤組織尤其是其中乏氧細胞的作用，從而提高放療效果。血卟啉及其衍生物(H

3、pD)對腫瘤組織有特異性較強的親和力，可以選擇性濃聚在腫瘤組織內，當通過特定波長的光激發(fā)后能從低能態(tài)轉化到高能態(tài)，從而達到殺傷腫瘤細胞的目的。目前已有許多實驗證實HpD可增強惡性腫瘤組織對放射線的敏感性，從而提高放療療效。本實驗旨在探討血卟啉衍生物喜泊分聯(lián)合放療對小鼠H22肝癌治療及其放療增敏作用，并初步探討其作用機制。
　　方法:
　　1.建立H22肝癌移植瘤小鼠動物模型及實驗分組:將50只H22肝癌荷瘤昆明小鼠隨機分為:

4、對照組、單純放療組、小劑量喜泊分加放療組（聯(lián)合Ⅰ組）、中劑量喜泊分加放療組（聯(lián)合Ⅱ組）、大劑量喜泊分加放療組（聯(lián)合Ⅲ組）。對照組在避光10小時后與各治療組同時腹腔麻醉;單純放療組在避光10小時后腹腔麻醉狀態(tài)下給予5GyX線放療;聯(lián)合Ⅰ組給予喜泊分5mg/Kg尾靜脈注射，避光10小時后腹腔麻醉狀態(tài)下給予5GyX線放療;聯(lián)合Ⅱ組給予喜泊分15mg/Kg尾靜脈注射，避光10小時后腹腔麻醉狀態(tài)下給予5GyX線放療;聯(lián)合Ⅲ組給予喜泊分20mg/K

5、g尾靜脈注射，避光10小時后腹腔麻醉狀態(tài)下給予5GyX線放療。
　　2.自處理開始后，隔日觀察荷瘤小鼠皮下移植瘤的一般生長情況，并測量其體積，繪制腫瘤生長曲線，計算腫瘤生長抑制率、q值和增敏系數(shù)。處理后第14天每組處死4只小鼠，剝離腫瘤組織及脾臟，并稱重記錄為瘤重、脾重，計算腫瘤抑制率及脾臟指數(shù)。每組未處死小鼠任其自然生長，觀察各組小鼠生存時間，計算各實驗組生命延長率并對所有小鼠進行生存分析。
　　3.腫瘤組織石蠟切片并腿染

6、色觀察病理形態(tài)，流式細胞儀(FCM)檢測荷瘤小鼠腫瘤細胞凋亡及細胞周期分布。
　　4.統(tǒng)計分析:應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。計量資料數(shù)據(jù)用(x)±s表示。多組樣本間均數(shù)比較應用單因素方差分析，多組間的兩兩比較分析用S-N-K檢驗進行，生存分析采用Kaplan-Meier法。各檢驗均以P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　喜泊分聯(lián)合放療治療后昆明小鼠皮下移植瘤生長受到抑制，且小鼠

7、生活質量較對照組及單純放療組升高。各聯(lián)合治療組在不同時間段其q值均＞1，其中以聯(lián)合治療Ⅲ組均值最大。在處理后第14天各組小鼠腫瘤重量分別為7.229±0.204g、5.640±0.343g、5.453±0.448g、5.027±0.258g和4.677±0.381g，單純放療組和聯(lián)合治療組的腫瘤重量明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。放療組、聯(lián)合Ⅰ組、聯(lián)合Ⅱ組及聯(lián)合Ⅲ組腫瘤抑制率分別為21.98％、24.57％、30.46％、35.30％

8、。流式細胞儀(FCM)分析對照組、單純放療組及各聯(lián)合組腫瘤細胞凋亡率分別為:3.44±1.06％、7.86±1.58％、14.13±3.25％、20.07±5.42％、29.00±6.82％，聯(lián)合組較其余組凋亡率升高，但差異無統(tǒng)計學意義。FCM檢測細胞周期顯示單純放療組及聯(lián)合組G2/M期細胞較對照組增多，各組G2/M期細胞所占比例分別為9.60±1.730％、11.45±2.520％、14.08±3.398％、22.05±3.313％、

9、26.63±2.938％。5組小鼠生存期比較可見治療組較對照組小鼠生存時間均延長，以聯(lián)合治療組最長。單純放療組、聯(lián)合Ⅰ組、聯(lián)合Ⅱ組及聯(lián)合Ⅲ組生命延長率分別為22.59％、49.56％、86.91％、58.21％，以治療聯(lián)合Ⅱ組最長，放療組最短。
　　結論:
　　1.喜泊分聯(lián)合放療對小鼠H22肝癌生長及增殖有抑制作用，且在一定范圍內其作用與藥物濃度呈正相關性。以20mg/kg喜泊分聯(lián)合放療組抑瘤作用最強。
　　2.喜泊分

10、對小鼠H22肝癌細胞有放射增敏作用，且在一定范圍內其增敏強度隨喜泊分濃度的增加而增強。以20mg/kg喜泊分放射增敏作用最強。
　　3.喜泊分聯(lián)合放療治療小鼠H22肝癌可延長小鼠生存期。以15mg/kg喜泊分聯(lián)合放療組小鼠生存期最長。
　　4.喜泊分可抑制H22肝癌細胞生長并增強其放射敏感性的可能機制是影響細胞周期分布（將細胞周期阻滯在G2/M期）、誘導細胞凋亡。
　　5.在本實驗中，從治療效果、生活質量及生存期等角度