降血尿酸乳酸菌篩選及乳桿菌對高血尿酸血癥大鼠作用的研究.pdf

1、目的:
　　 1.從55株來自大連醫(yī)科大學微生態(tài)學教研室菌種保藏庫的乳酸菌中篩選出對核苷具有較快分解速率的菌株，通過生物學特性評價，選擇DM9218作為最優(yōu)菌株。
　　 2.觀察DM9218對高尿酸血癥模型大鼠的干預效果。
　　 3.對DM9218進行初步安全性評價。
　　 方法:
　　 1.高效降解核苷乳酸菌株的篩選，生物學特性評價
　　 基于RP-HPLC方法，通過檢測含有肌苷、鳥苷的

2、反應液在接種乳酸菌并培養(yǎng)60min后，反應液中肌苷與鳥苷含量變化，篩選出若干株對核苷具有最快分解速率的菌株做為候選菌株。
　　 候選菌株生物學特性評價包括耐酸、耐膽鹽試驗，候選菌株的膽鹽耐受馴化實驗，耐消化道酶類（胃蛋白酶、胰蛋白酶）實驗，抑菌實驗，抗生素敏感實驗，產(chǎn)H2O2能力實驗及HT-29細胞粘附性實驗等部分，根據(jù)以上實驗結果，確定最優(yōu)目的菌株。
　　 2.最優(yōu)目的菌株對高尿酸血癥模型大鼠的干預效果研究
　　

3、 將清潔級Wistar大鼠隨機分五組:正常對照組，高尿酸血癥模型組，乳酸菌低劑量組，乳酸菌高劑量組，別嘌呤醇干預組。在造高尿酸血癥模型的同時對大鼠進行乳酸菌菌懸液灌胃，于實驗第0、7、14d采血，測定血漿中尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。
　　 3.最優(yōu)目的菌株初步安全性評價
　　 最優(yōu)目的菌株初步安全性評價實驗包括以下三個部分:急毒實驗，質粒檢測及細菌易位判斷。
　　 4.對最優(yōu)目的菌株進行

4、菌種鑒定
　　 對最優(yōu)目的菌株進行16SrDNA測序，結合生化鑒定確定其種屬性。
　　 結果:
　　 1.自55株供試乳酸菌株中篩選出4株具有較高核苷分解速率的菌株:DM9218、DM9242、DM9505、DM9514。
　　 對這四株候選菌株進行的生物學特性評價結果表明，DM9218擁有最大的核苷分解速率，經(jīng)馴化后可耐受胃腸道環(huán)境，具有一定的抑菌能力，對多種抗生素敏感，細胞粘附性良好;因此選擇DM92

5、18做為最優(yōu)菌株，進行后繼實驗研究。
　　 2.菌株DM9218對高尿酸血癥模型大鼠的干預實驗結果表明，DM9218低劑量的血尿酸含量明顯低于高尿酸血癥模型組(P＜0.05)，明顯高于別嘌呤醇干預組(P＜0.05)，DM9218高劑量組的血尿酸含量明顯低于高尿酸血癥模型組(P＜0.05)，明顯低于DM9218低劑量組(P＜0.05)，明顯高于別嘌呤醇干預組(P＜0.05);各組血尿素氮含量差異不顯著(P＞0.05);各組血肌酐含

6、量差異不顯著(P＞0.05)。
　　 3.菌株DM9218不含有質粒，在正常情況下不會發(fā)生細菌易位，菌株DM9218無急毒性。
　　 4.經(jīng)16SrDNA測序結合生化鑒定結果表明，DM9218為植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)。
　　 結論:
　　 通過對55株供試乳酸菌的定向篩選，篩選出一株菌DM9218，它具有最高的體外降解核苷能力，不含有質粒，正常情況下不會發(fā)生細菌易位，不