改良梯度凝膠電泳法檢測冠心病患者血清HDL亞類的研究.pdf

1、冠心病(CHD)具有高發(fā)病率和高死亡率的臨床特征，嚴重威脅著人類健康。大量研究已經(jīng)證實血脂異常是CHD的重要危險因素之一，并直接參與其發(fā)病機制。過去20余年，從飲食控制到他汀類藥物為主的大規(guī)模多中心臨床試驗幾乎一致表明，調(diào)脂治療可以使CHD患者的主要心臟事件(不穩(wěn)定性心絞痛、心肌梗死、猝死等)的發(fā)生率和死亡率顯著降低。基于循證醫(yī)學的證據(jù)，通過調(diào)脂干預防治CHD的臨床策略得到一致公認，并在實踐中成功地取得了明顯的效益。 臨床評價血

2、脂異常與否的指標很多，早期比較重視高脂血癥的危險。治療上以降脂為主，通常采用他汀類和/或貝特類藥物來降低總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)。然而調(diào)查發(fā)現(xiàn)，部分確診CHD患者的血脂水平正常，難以從單因素的角度分析血脂異常在冠心病發(fā)病機制中的作用。 高密度脂蛋白(HDL)具有抗動脈粥樣硬化的保護作用，其機制主要與其逆轉運膽固醇(RCT)、保護血管內(nèi)皮功能、抗脂質(zhì)過氧化損傷和抑制炎癥反應等作用有關。流

3、行病學證據(jù)表明，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)降低是冠心病的一個獨立危險因素。因此，防治血脂異常的策略演進以調(diào)脂為主，其重點在于降低LDL-C和升高HDL-C。常規(guī)檢測HDL-C水平表達的僅是HDL中膽固醇的含量，有研究認為HDL-C并不能確切反映HDL在RCT中的功能。 通過HDL亞類表達RCT的狀態(tài)一直是研究的熱點之一。HDL各亞類參與RCT過程，同時本身的組成和顆粒大小發(fā)生變化，其異常與動脈粥樣硬化、冠心病有著良好的相關

4、性，是動脈粥樣硬化及冠心病的獨立危險因素。血清HDL的組成非常復雜，包括多種亞類。梯度超速離心法通常將HDL按照其密度分為HDL2和HDL3。梯度凝膠電泳(GGE)法可按顆粒大小進一步將HDL2分為HDL2b、HDL2a，HDL3分為HDL3a、HDL3b和HDL3c臨床研究顯示這些亞類在CHD和糖尿病患者中顯著改變，這些變化可能作為RCT損傷的標志。另外，人血清還有較低密度的HDL1和極高密度脂蛋白(VHDL)，正常情況下兩者含量極低

5、，代謝極快，一般方法難以檢測，故對它們的研究甚少。 以往研究HDL亞類的方法存在一些問題。首先，通常需要昂貴的設備，操作費時，很難大規(guī)模應用。其次，由于HDL與其它脂蛋白(Non-HDL)的顆粒特性差異懸殊，難以在同一檢測系統(tǒng)中兼顧它們從而取得同步表達的滿意效果，因此以往方法只能忽略Non-HDL而僅對HDL亞類進行分析，這樣就難以順應目前綜合多因素分析血脂狀態(tài)的發(fā)展趨勢。 改良梯度凝膠電泳法(GGE法)改良了傳統(tǒng)GGE

6、的凝膠設置，采用分段梯度凝膠電泳法，同步分離血清HDL亞類和Non-HDL，能夠?qū)DL分離出明顯的10條亞帶，提高了分辨能力；在定量方法上采取統(tǒng)一的參照點，量化出各組分在同一總體中的相對含量，達到了全面分析血脂整體概貌的效果。重復性實驗顯示，改良GGE法具有良好的穩(wěn)定性，變異系數(shù)(CV)達到了國家血脂檢測標準化的要求。目前該研究平臺已經(jīng)建立，初步取得的一些資料提示HDL亞類的含量在不同疾病狀態(tài)下表現(xiàn)近乎規(guī)律的變化，其表達HDL的效果較

7、常規(guī)HDL-C指標提示更多的信息，并將在系列研究中逐步得到驗證和應用。 目的： 高密度脂蛋白(HDL)具有抗動脈粥樣硬化的作用，是冠心病(CHD)的保護因子，其機制主要與膽固醇逆轉運(RCT)有關。通過HDL亞類表達RCT的狀態(tài)是研究的熱點之一。本研究應用改良密度梯度凝膠電泳(GGE)法檢測HDL亞類，初步調(diào)查CHD患者血清HDL亞類的臨床特點，為深入基礎研究尋找線索。 對象與方法： 1、研究對象：

8、 1.1健康成人調(diào)查的研究從單位體檢人群中篩選151例，其中男81例，女70例。 1.2病例對照研究體檢健康人群40例入選健康對照組，其中男34例，女6例；住院患者73例入選疾病組，其中，非CHD的其它疾病(Non-CHD)組19例，男12例，女7例；CHD組54例，男40例，女14例。 2、研究方法：常規(guī)檢測研究對象的血脂水平(TG、TC、LDL-C和liDL-C)，同時采用改良GGE法檢測研究對象的血清HDL及其亞

9、類含量；根據(jù)健康成人調(diào)查研究的結果，初步得出血清HDL及其亞類的異常狀態(tài)和判斷標準。病例對照研究比較他們的均值和異常率的組間差異，疾病組按照常規(guī)血脂異常的標準進行分組，比較不同血脂狀態(tài)下HDL及其亞類含量的均值和異常率的差異，疾病組還進一步按照冠狀動脈造影結果Gensini積分(GS)進行分組，比較HDL各亞類含量的組間差異。 3.統(tǒng)計方法：計量數(shù)據(jù)用均值±標準差表示，計量數(shù)據(jù)用率表示。用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資

10、料的比較用t檢驗、方差分析及非參數(shù)檢驗，均值的組間兩兩比較采用LSD法，計數(shù)資料率的比較用卡方檢驗，P≤0.05表示有顯著性差異。 結果： 1.改良GGE法可將血清HDL同步分離出10條可見的電泳亞帶，將其歸為4種亞類：HDL(A)、HDL(B)、HDL(C)和HDL(V)。其中，HDL(A)電泳遷移最慢，顆粒最大，膽固醇的相對含量最高；HDL(V)在分離凝膠中呈獨立分帶，電泳遷移最快，顆粒最小，膽固醇的相對含量最低。經(jīng)

11、過光密度掃描儀掃描，即可得到血清HDL亞類的電泳圖譜及量化結果。 2.應用改良GGE法檢測151例健康成人血清HDL及其亞類的含量，初步得出血清HDL及其各亞類異常狀態(tài)和判斷標準。 3.在健康對照組、CHD組及Non-CHD組中，HDL-C水平在CHD組和Non-CHD組均較健康對照組顯著降低(P<0.001)，疾病組間比較差異無顯著性意義；用改良GGE法檢測HDL總量在CHD組較健康對照組顯著降低(P<0.01)，在N

12、on-CHD組有所降低，但與健康對照組和CHD組比較均無顯著性意義；HDL(A)含量異常升高的情況僅僅出現(xiàn)在CHD組中；與健康對照組相比，在CHD組和Non-CHD組的HDL(B)含量顯著降低，HDL(C)含量顯著升高，疾病組間比較差異無顯著性意義；HDL(V)含量降低僅僅出現(xiàn)在CHD組，較Non-CHD組和健康組均顯著降低(P<0.01，P<0.001)。 4.在CHD組內(nèi)，HDL總量在血脂升高和HDL-C降低的狀態(tài)下降低更明

13、顯，與血脂不高、HDL-C不低的狀態(tài)下相比差異分別有顯著性意義(P<0.001，P<0.01)；HDL(B)含量在血脂升高和HDL-C降低的狀態(tài)下降低的更明顯(P<0.001，P<0.01)；HDL(V)含量在血脂升高的狀態(tài)下降低的更明顯(P<0.05)。按照Gensini積分分組，HDL(A)和HDL(V)與冠狀動脈狹窄嚴重程度有關聯(lián)，在GS>60組HDL(A)含量顯著升高(P<0.01)，HDL(V)含量顯著降低(P<0.05)。

14、 5.改良GGE法檢測HDL及其亞類總的異常率在CHD組和Non-CHD組分別為67％和42％。在CHD組內(nèi)，無論血脂升高與否，HDL及其亞類的異常率均較高。在Non-CHD組內(nèi)，在血脂升高或HDL-C降低的狀態(tài)下，HDL及其亞類總的異常率均較高。HDL總量的異常率在血脂升高的情況下更明顯。 結論： 1.改良GGE法檢測血清HDL及其亞類的表現(xiàn)與以往方法不同，其優(yōu)勢體現(xiàn)在同步分離的高分辨能力和整體水平的定量分析上。