中藥二黃散對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠宮頸炎的治療效果及藥物作用機(jī)制的探討.pdf

1、研究背景：慢性宮頸炎是婦女常見(jiàn)病、多發(fā)病，發(fā)病率高達(dá)60[％]以上，其中以宮頸糜爛最為常見(jiàn)。由于其與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，因而對(duì)該病的防治應(yīng)引起足夠的重視。
　　 目前，臨床對(duì)于宮頸糜爛的防治尚無(wú)安全有效的方法，其治療仍以物理療法為主，主要通過(guò)冷、熱等各種物理手段(激光、冷凍、紅外線(xiàn)及微波等)，將宮頸糜爛面單層柱狀上皮破壞，使其壞死脫落后，為新生的復(fù)層鱗狀上皮覆蓋。物理療法治療宮頸糜爛的療效是肯定的，但存在術(shù)后陰道長(zhǎng)時(shí)間分泌物增

2、多，甚至有大量水樣排液及脫痂時(shí)出血，創(chuàng)面愈合時(shí)間長(zhǎng)，且在創(chuàng)面尚未愈合期間(4～8周)需禁止性生活等缺點(diǎn)，許多患者不愿接受物理療法。因此尋找一種能有效治療宮頸糜爛，又能避免物理治療的副反應(yīng)，對(duì)于防止宮頸癌變具有非常積極的意義。
　　 近年來(lái)的研究認(rèn)為，炎癥和創(chuàng)傷修復(fù)受多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)和影響，其中血小板活化因子(PAF)、前列腺素E(PGE2)和表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、血小板源性衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)是目前研究最多、最

3、深入、應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞因子。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，PAF和PGE2在組織炎癥反應(yīng)中起著重要的作用，促使炎癥的發(fā)生、發(fā)展，對(duì)組織的愈合起著不利的作用；而EGF和PDGF是體內(nèi)一種正常微量的物質(zhì)，在人體組織內(nèi)分布極為廣泛，起著調(diào)節(jié)細(xì)胞DNA合成、促進(jìn)細(xì)胞分裂和刺激血管生成的作用，對(duì)受傷后組織的快速修復(fù)起著十分重要的作用。正常情況下，EGF、PDGF含量很低，因而組織的自身修復(fù)是一個(gè)緩慢的過(guò)程。
　　 國(guó)內(nèi)外學(xué)者在應(yīng)用中草藥防治組織器官炎

4、癥的大量研究中發(fā)現(xiàn)黃連、雄黃等中藥對(duì)金黃色葡萄球菌、志賀氏痢疾桿菌等有較強(qiáng)的抗菌作用，對(duì)炎癥介質(zhì)的作用也得到了普遍認(rèn)可。黃連水煎液提取物對(duì)組織的修復(fù)再生有很好的作用。臨床上含有黃連或雄黃的中藥復(fù)方治療宮頸糜爛有較好的療效，我們前期的臨床工作也表明，中藥二黃散對(duì)宮頸糜爛也有很好的治療效果。但目前局部用中藥治療宮頸炎的研究仍停留在藥物的臨床研究上，對(duì)中藥組方及其藥理作用的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本研究根據(jù)中醫(yī)辨證施治理論，將黃連、雄

5、黃等五味中藥合理配伍，并按一定比例配方，制成了散劑，取名為“二黃散”。通過(guò)對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、臨床治療效果評(píng)估，并運(yùn)用病理形態(tài)學(xué)、分子免疫學(xué)、分子生物學(xué)的方法，探討中藥二黃散治療宮頸炎的藥效學(xué)，以及藥物的分子作用機(jī)制，為研制和開(kāi)發(fā)治療宮頸炎實(shí)用有效的中藥新方劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 本研究分為以下三部分，現(xiàn)分述如下：
　　 第一部分
　　 目的：用低濃度苯酚膠漿(20[％])制備大鼠宮頸炎模型。
　　 方法：取苯酚

6、4ml，阿拉伯樹(shù)膠4ml，加蒸餾水至20ml，配成20[％]的苯酚膠漿。除正常對(duì)照組15人外，其余54只均用導(dǎo)尿管向陰道深部注入苯酚膠漿，每只動(dòng)物注入1.5ml,2天1次,共5次。觀察實(shí)驗(yàn)大鼠的癥狀和體征，光學(xué)顯微鏡觀察大鼠宮頸組織病理形態(tài)學(xué)變化，對(duì)制作的大鼠宮頸炎模型進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果：我們運(yùn)用20[％]苯酚膠漿隔日給藥5次,可見(jiàn)大鼠陰道口紅腫、有的有膿性分泌物流出；陰道粘膜變性或脫落,形成潰瘍,宮頸充血水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、

7、炎性肉芽組織或纖維增生；大鼠食欲減退、活動(dòng)減少、體重減輕。
　　 結(jié)論：采用20[％]苯酚膠漿隔日給藥5次，能成功復(fù)制大鼠陰道及宮頸炎動(dòng)物模型，且可重復(fù)性好。
　　 第二部分
　　 目的：運(yùn)用中藥二黃散對(duì)大鼠宮頸炎進(jìn)行治療，觀察治療效果，探討其藥物作用機(jī)制。
　　 方法：造模后第2天，開(kāi)始陰道局部給藥，正常對(duì)照組不處理，陽(yáng)性對(duì)照組給消糜栓，陰性對(duì)照組給空白基質(zhì)，二黃散Ⅰ組和二黃散Ⅱ組分別給予相當(dāng)于人臨床用

8、量的30倍和45倍的二黃散。1次/天，隔日1次，共12次。治療結(jié)束后次日處死動(dòng)物，解剖子宮后取出觀察,并記錄肉眼所見(jiàn)。做常規(guī)石蠟切片,HE染色，鏡下觀察陰道至子宮組織形態(tài)學(xué)變化，評(píng)價(jià)組織愈合效果。采用放射免疫分析法測(cè)定PAF和PGE2含量，免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)經(jīng)二黃散治療的實(shí)驗(yàn)大鼠宮頸炎組織中EGF和PDGF的蛋白表達(dá)，RT-PCR方法檢測(cè)EGF和PDGFmRNA的表達(dá)，免疫印跡法檢測(cè)EGFR蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：中藥二黃

9、散Ⅰ、Ⅱ組和消糜栓組(陽(yáng)性對(duì)照組)與陰性對(duì)照組相應(yīng)部位比較，病變及炎癥程度明顯減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，未見(jiàn)出血和壞死，比較差異有顯著意義(P<0.05)。中藥二黃散Ⅰ、Ⅱ組與陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)宮頸組織形態(tài)學(xué)的影響無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 中藥二黃散Ⅰ、Ⅱ組中PAF和PGE2含量減低，治療前后的含量分別為：745.22±153.10，624.55±70.21；614.65±128.53，594.52±143.46；治療后

10、PAF、PGE2接近正常對(duì)照組，與陰性對(duì)照組比較差異有顯著意義(P<0.05)。
　　 EGF、PDGF免疫組化學(xué)結(jié)果顯示，中藥二黃散Ⅰ、Ⅱ組蛋白表達(dá)均顯著高于陰性對(duì)照組和正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，中藥二黃散Ⅰ、Ⅱ組EGFmRNA平均灰度分別為(4.53±0.39)，(4.88±0.28)，顯著高于陰性對(duì)照組和正常對(duì)照組(2.33±0.57、1.87±0.40)(P<0.05，P<0.01)；二黃散Ⅰ、Ⅱ組E

11、GFR蛋白表達(dá)均顯著高于陰性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而PDGFmRNA平均灰度分別為(2.94±0.42),(3.51±0.29)，高于正常對(duì)照組和陰性對(duì)照組(1.55±0.52)(1.43±0.45)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。陰性對(duì)照組EGF和PDGFmRNA與正常對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：二黃散能有效地改善實(shí)驗(yàn)大鼠宮頸炎炎癥程度，宮頸炎大鼠用藥后，炎性細(xì)胞數(shù)量明顯

12、減少，癥狀顯著減輕，二黃散對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠宮頸炎有很好的治療作用。二黃散能降低宮頸炎組織中PAF、PGE2的含量，促進(jìn)宮頸組織中生長(zhǎng)因子EGF和PDGFmRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白合成，提高EGF受體蛋白的表達(dá)，促使宮頸鱗狀上皮細(xì)胞的增殖、分化，有利于糜爛組織愈合。使損傷與修復(fù)因素趨于平衡，這可能是二黃散治療宮頸炎的機(jī)制之一。
　　 第三部分
　　 目的：觀察二黃散對(duì)不同類(lèi)型宮頸糜爛的治療效果及藥物作用機(jī)制。
　　 方法：用二黃

13、散治療宮頸糜爛患者60例，其中輕度糜爛18例、中度23例、重度19例；單純型26例，顆粒型21例，乳突型13例。將二黃散藥粉噴敷于宮頸糜爛面上，隔日1次，7次為一療程，連用2～4個(gè)療程。觀察治療前后糜爛面的大小、病變的深淺以及患者的主觀癥狀等。ELISA檢測(cè)治療前后宮頸分泌物中EGF、PDGF的含量變化。
　　 結(jié)果：(1)輕度糜爛有效率為94.4[％]，中度糜爛有效率為86.9[％]，重度糜爛有效率為73.7[％]；單純型糜爛

14、有效率為96.1[％]，顆粒型糜爛有效率為90.4[％]，乳突型糜爛有效率為53.8[％]?？傆行蕿?5[％]。(2)治療前后患者EGF宮頸粘液中含量為(41.56±16.51、97.45±20.12)；PDGF宮頸粘液中的平均含量分別為：(32.74±10.22、56.20±12.33)。治療前后宮頸粘液中EGF和PDGF的含量明顯增高，比較差異具有顯著意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：中藥二黃散能明顯改善宮頸糜爛患者的臨