一氧化碳吸入對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺部炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、實(shí)驗(yàn)一、一氧化碳吸入對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠動(dòng)脈氧合功能的影響 目的：觀察低濃度一氧化碳(CO)吸入對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)大鼠動(dòng)脈氧合功能及碳氧血紅蛋白(COHb)含量的影響。 方法：72只雄性SD大鼠隨機(jī)數(shù)字表法均分為正常對(duì)照、單純CO吸入、ALI和ALI+CO吸入四組，陰莖背靜脈注射給藥。對(duì)照組注入生理鹽水，單純CO吸入組注入生理鹽水后持續(xù)吸入250ppmCO，ALI組注入LPS5mg/kg體重

2、，ALI+CO吸入組注入LPS5mg/kg體重誘導(dǎo)ALI后持續(xù)吸入250ppmCO，各組注入液體總量相同。在各組觀察的1、3和6h批次(每批次6只)剖腹，自腹主動(dòng)脈放血處死，留取動(dòng)脈血分析血?dú)夂虲OHb濃度。 結(jié)果：四組組間相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)及組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較，動(dòng)脈氧分壓(PaO2)、動(dòng)脈氧飽和度(SaO2)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。COHb(﹪)：?jiǎn)渭僀O吸入組[(7.2±1.1)、(6.9±1.4)、(7.1±1.7)]、ALI組[(1.3±

3、0.6)、(1.4±0.4)、(1.3±0.5)]及ALI+CO吸入組[(7.0±1.3)、(6.9±1.1)、(7.1±1.6)]顯著升高，與正常對(duì)照組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)[(0.6±0.4)、(0.5±0.2)、(0.6±0.3)]比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；單純CO吸入組、ALI+CO吸入組的COHb顯著高于ALI組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(P均＜0.05)。 結(jié)論：無(wú)論是5mg/kg體重LPS靜

4、脈注入，還是250ppmCO吸入均不影響大鼠動(dòng)脈氧合、增加COHb含量。 實(shí)驗(yàn)二、一氧化碳吸入對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺組織學(xué)及損傷評(píng)分的影響 目的：觀察低濃度一氧化碳(CO)吸入對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)大鼠肺組織學(xué)及損傷評(píng)分的影響。 方法：72只雄性SD大鼠隨機(jī)數(shù)字表法均分為正常對(duì)照、單純CO吸入、ALI和ALI+CO吸入四組，陰莖背靜脈注射給藥。對(duì)照組注入生理鹽水，單純CO吸入組注入生理鹽

5、水后持續(xù)吸入250ppmCO，ALI組注入LPS5mg/kg體重，ALI+CO吸入組注入LPS5mg/kg體重誘導(dǎo)ALI后持續(xù)吸入250ppmCO，各組注入液體總量相同。在各組觀察的1、3和6h批次(每批次6只)剖腹，自腹主動(dòng)脈放血處死，4℃生理鹽水肺灌洗，取右下肺組織，放入10﹪多聚甲醛溶液中固定24小時(shí)，光鏡觀察并盲法評(píng)分比較組織學(xué)變化。 結(jié)果：ALI組1h可見(jiàn)肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡及間質(zhì)充血、出血及廣泛炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，部分肺泡塌

6、陷，這些變化在3h、6h逐漸加重；ALI+CO吸入組1h可見(jiàn)上述組織學(xué)損傷明顯減輕，3h、6h減輕程度與1h類似。損傷評(píng)分：ALI組1、3和6h[(3.28±0.68)、(3.74±0.82)、(4.32±0.95)]與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的正常對(duì)照組[(0.28±0.22)、(0.26±0.24)、(0.30±0.32)及單純CO吸入組[(0.29±0.10)、(0.28±0.13)、(0.29±0.12)]比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.0

7、5)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較差異亦較顯著，即隨時(shí)程延長(zhǎng)，損傷評(píng)分增加(P均＜0.05)；ALI+CO吸入組1、3和6h[(1.84±1.15)、(1.83±0.23)、(1.84±0.29)]顯著低于ALI組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(P均＜0.05)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間比較，差異不明顯。結(jié)論：5mg/kg體重LPS靜脈注入，可造成大鼠急性肺損傷；250ppmCO吸入可顯著減輕LPS誘導(dǎo)的肺損傷，但不隨時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)。 實(shí)驗(yàn)三、一氧化碳吸入對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急

8、性肺損傷大鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)的影響 目的：觀察低濃度一氧化碳(CO)吸入對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)大鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)的影響。 方法：72只雄性SD大鼠隨機(jī)數(shù)字表法均分為正常對(duì)照、單純CO吸入、ALI和ALI+CO吸入四組，陰莖背靜脈注射給藥。對(duì)照組注入生理鹽水，單純CO吸入組注入生理鹽水后持續(xù)吸入250ppmCO，ALI組注入LPS5mg/kg體重，ALI+CO吸入組注入LPS5mg/kg體重誘導(dǎo)ALI后持

9、續(xù)吸入250ppmCO，各組注入液體總量相同。在各組觀察的1、3和6h批次(每批次6只)剖腹，自腹主動(dòng)脈放血處死，4℃生理鹽水肺灌洗，取右下肺組織，置入2.5﹪戊二醛溶液中固定48小時(shí)，透視電鏡觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果：正常對(duì)照組、單純CO吸入組均見(jiàn)大鼠肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡上皮細(xì)胞形態(tài)正常，胞內(nèi)細(xì)胞器清晰可見(jiàn)，基底膜薄而均勻，肺泡膈不寬，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞連接緊密、基膜完好。ALI組可見(jiàn)肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔狹窄、內(nèi)有較多滲出，肺泡上皮

10、細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞間聯(lián)系中斷，可見(jiàn)胞核固縮、溶解等凋亡表現(xiàn)，肺泡基底膜受損，肺泡膈增寬，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞、細(xì)胞間連接消失。ALI+CO吸入組肺泡超微結(jié)構(gòu)損傷減輕，肺泡上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本完整，細(xì)胞器形態(tài)大致正常，偶見(jiàn)細(xì)胞凋亡；毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及細(xì)胞間連接存在，氣血屏障受損較輕。結(jié)論：5mg/kg體重LPS靜脈注入，可造成大鼠嚴(yán)重肺泡超微結(jié)構(gòu)損傷；250ppmCO吸入可顯著減輕LPS誘導(dǎo)的肺泡超微結(jié)構(gòu)損傷。 實(shí)驗(yàn)四、一氧化碳吸

11、入對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響 目的：觀察低濃度一氧化碳(CO)吸入對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)大鼠肺氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響。 方法：72只雄性SD大鼠隨機(jī)數(shù)字表法均分為正常對(duì)照、單純CO吸入、ALI和ALI+CO吸入四組，陰莖背靜脈注射給藥。對(duì)照組注入生理鹽水，單純CO吸入組注入生理鹽水后持續(xù)吸入250ppmCO，ALI組注入LPS5mg/kg體重，ALI+CO吸入組注入LPS5mg/kg體

12、重誘導(dǎo)ALI后持續(xù)吸入250ppmCO，各組注入液體總量相同。在各組觀察的1、3和6h批次放血處死大鼠(每批次6只)，取肺制作組織勻漿，化學(xué)比色法測(cè)定丙二醛(MDA)含量，髓過(guò)氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、黃嘌呤氧化酶(XOD)和谷光甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性。 實(shí)驗(yàn)五、一氧化碳吸入對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺炎癥因子的影響 目的：觀察低濃度一氧化碳(CO)吸入對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(A

13、LI)大鼠肺炎癥因子的影響。方法：72只雄性SD大鼠隨機(jī)數(shù)字表法均分為正常對(duì)照、單純CO吸入、ALI和ALI+CO吸入四組，陰莖背靜脈注射給藥。對(duì)照組注入生理鹽水，單純CO吸入組注入生理鹽水后持續(xù)吸入250ppmCO，ALI組注入LPS5mg/kg體重，ALI+CO吸入組注入LPS5mg/kg體重誘導(dǎo)ALI后持續(xù)吸入250ppmCO，各組注入液體總量相同。在各組觀察的1、3和6h批次放血處死大鼠(每批次6只)，取肺制作組織勻漿，酶聯(lián)免疫

14、吸附法(ELISA)測(cè)定腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和白細(xì)胞介素-10(IL-10)含量。 實(shí)驗(yàn)六、一氧化碳吸入對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷 大鼠肺細(xì)胞凋亡的影響目的：觀察低濃度一氧化碳(CO)吸入對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)大鼠肺細(xì)胞凋亡的影響。方法：72只雄性SD大鼠隨機(jī)數(shù)字表法均分為正常對(duì)照、單純CO吸入、ALI和ALI+CO吸入四組，陰莖背靜脈注射給藥。對(duì)照組注入生理鹽水，單

15、純CO吸入組注入生理鹽水后持續(xù)吸入250ppmCO，ALI組注入LPS5mg/Kg體重，ALI+CO吸入組注入LPS5mg/kg體重誘導(dǎo)ALI后持續(xù)吸入250ppmCO，各組注入液體總量相同。在各組觀察的1、3和6h批次放血處死大鼠(每批次6只)，取肺制作單細(xì)胞懸液，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 實(shí)驗(yàn)七、一氧化碳吸入對(duì)急性肺損傷大鼠肺血紅素氧合酶-1表達(dá)的影響及意義 目的：觀察低濃度一氧化碳(CO)吸入對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)

16、大鼠急性肺損傷(ALI)肺血紅素氧合酶-1(HO-1)表達(dá)的影響，探討其意義。方法：72只雄性SD大鼠隨機(jī)數(shù)字表法均分為正常對(duì)照、單純CO吸入、ALI和ALI+CO吸入四組，陰莖背靜脈注射給藥。對(duì)照組注入生理鹽水，單純CO吸入組為正常大鼠注入生理鹽水后持續(xù)吸入250ppmCO，ALI組注入LPS5mg/kg體重，ALI+CO吸入組注入LPS5mg/kg體重誘導(dǎo)ALI后持續(xù)吸入250ppmCO，各組注入液體總量相同。在各組觀察的1、3和6

17、h批次放血處死大鼠(每批次6只)，4℃生理鹽水肺灌洗，取肺制作組織勻漿，半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(SqRT-PCR)測(cè)定HO-1mRNA。 實(shí)驗(yàn)八、p38MAPK信號(hào)通路在脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠發(fā)病中的作用目的：觀察p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信號(hào)通路在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)大鼠發(fā)病中作用。方法：36只雄性SD大鼠隨機(jī)數(shù)字表法均分為正常對(duì)照和ALI兩組，陰莖背靜脈注射給藥。對(duì)照組注入等量生理鹽

18、水，ALI組注入LPS5mg/kg體重。在觀察的1、3和6h批次放血處死大鼠(每批次6只)，取肺制作組織勻漿，Western免疫蛋白印跡法測(cè)定磷酸化p38MAPK含量。 實(shí)驗(yàn)九、p38MAPK在一氧化碳吸入調(diào)控脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺部炎癥反應(yīng)中的作用 目的：觀察絲裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)信號(hào)傳道通路在介導(dǎo)低濃度一氧化碳(CO)吸入對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(ALI)大鼠肺部炎癥反應(yīng)影響中的作用。