糖尿病早期視網(wǎng)膜膠質(zhì)細胞病變及其對血視網(wǎng)膜屏障的影響.pdf

1、本文對糖尿病早期視網(wǎng)膜膠質(zhì)細胞病變及其對血視網(wǎng)膜屏障的影響進行了探討,主要內(nèi)容有: 1、STZ誘導糖尿病大鼠模型的建立及早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜GFAP和(3ccIudin表達的變化 目的：研究糖尿病時視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞緊密連接蛋白和膠質(zhì)細胞GFAP表達的改變。 方法：按60mg/kg一次性大鼠腹腔注射STZ，3d后測血糖¨．0mmo!A以上為造模成功。用免疫熒光法和免疫印跡法分別從形態(tài)學和定量上觀察糖尿病時視網(wǎng)膜血

2、管內(nèi)皮細胞0cciudin和膠質(zhì)細胞GFAP表達的改變. 結果：糖尿病2w時，視網(wǎng)膜星型膠質(zhì)細胞GFAP表達減少同時有Ⅵu¨er細胞GFAP表達增加。第12w時，星型膠質(zhì)細胞GFAP表達接近消失，而Müller細胞大量表達GFAP。Occludin在正常視網(wǎng)膜不同血管分布不同。在糖尿病時，Occludin在毛細血管表達減少，而在視網(wǎng)膜動脈則表現(xiàn)為顆粒狀沉積. 結論：糖尿病時．視網(wǎng)膜膠質(zhì)細胞GFAP表達的改變伴隨著血管內(nèi)皮

3、細胞Occludin表達的變化，說明膠質(zhì)細胞可能通過影響內(nèi)皮細胞間的相互作用來增加BRB的通透性，導致糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生。 2、新生大鼠視網(wǎng)膜MOiler細胞和新生牛視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞體外分離、培養(yǎng)及鑒定 目的：體外分離培養(yǎng)新生大鼠視網(wǎng)膜MOiler細胞和新生牛視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞(boveinretinalvascularendothelialcells，BREC)，觀察其形態(tài)、結陶及生長情況. 方法：以酶輔助

4、顯微分離一酶消化法分離、單獨培養(yǎng)MOiler細胞和BREC．倒置相差顯微鏡觀察原代與傳代細胞生長情況，描記生長曲線．以脧質(zhì)細胞纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)抗體和VonWillebrand因子抗體分別對培養(yǎng)的Muller細咆和BREC進行免疫學鑒定．透射電鏡觀察細胞超微結構。 結果：體外成功培養(yǎng)出Müller細胞和BREC．GFAP抗體和VonWillebrand因子抗體染色均

5、為陽性，原代MOiler細胞呈星形、不覘則形，BREC呈多邊形、鋪路石樣，傳代細咆伸展更加明顯．呈密集單層生長。細胞生長曲線均接近“S”形。透射電鏡顯示均具有正常細胞器結陶。 結論：體外分離結合酶消化法培養(yǎng)大鼠Müller細胞及BREC．實驗方法操作簡便，獲得的細胞純度高，符合體內(nèi)生物學特性，為體外研究兩種細胞的相互作用打下良好的實驗基礎。 3、糖基化終末產(chǎn)物對體外培養(yǎng)Miiller細胞生長的影響 目的：探討體外

6、Mii}ler細胞在糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)作用下增殖活性的變化 方法：采用本實驗室培養(yǎng)及鑒定的新生大鼠Müller細胞，設置正常生長組和添加AGEs培養(yǎng)組，AGEs濃度在250ug/ml-1000ug/ml范圍內(nèi)逐步遞增。MTT法測定AGEs對體外純化培養(yǎng)g0[[er細胞增殖的影響。 結果：高濃度AGEs對Miiller細胞有明顯的促增殖作用，并在一定的濃度范圍內(nèi)(250ug/mi-1000ug/mi)細胞增殖活性呈

7、劑量依賴關系。 結論：體外高濃度AGEs可促進MUller細胞異常增殖，與臨床上觀察到增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變時膠質(zhì)細胞反應性增生情況一致，因此可以在體外用高濃度AGEs模擬體內(nèi)糖尿病環(huán)境，觀察脧質(zhì)細胞形態(tài)和功能的改變. 4、不同生長條件下Miiller細胞上清液對視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞生長的影響 目的：探討AGEs作用下異常增殖的Miiller細胞對視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞(REC)緊密連接蛋白(Occludin)表達的影

8、響。 方法：分別收集兩組細胞的上清液，加入培養(yǎng)的BREC中，分6組觀察。第①組未添加任何細胞上清液的BREC：第②組添加正常M[iller細胞上清液后的BREC：第③組添加AGEs作用后的Miiller細胞上清液后的BREC：第④組正常培養(yǎng)條件下的MUller細胞上清液：⑤AGEs作用后的Miiller細胞上清液；⑥無細胞組．為空白對照組，EL[SA法測定6組細胞上清液中Occludin的含量，比較其變化。 結果：添加正