視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)病變中的作用研究.pdf

1、目的：
　　1.研究視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞在STZ誘導的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中活化的特點，包括細胞形態(tài)、細胞密度、在視網(wǎng)膜各層分布、活化小膠質(zhì)細胞比率以及視網(wǎng)膜中小膠質(zhì)細胞特異性表面分子Iba-1mRNA表達的改變。
　　2．研究氯膦酸二鈉脂質(zhì)體經(jīng)玻璃體腔注射后對正常及糖尿病大鼠視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞的清除作用。
　　3.研究正常與糖尿病大鼠視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞經(jīng)氯膦酸二鈉脂質(zhì)體清除后對視網(wǎng)膜神經(jīng)病變的影響，包括神經(jīng)節(jié)細胞的數(shù)量、神經(jīng)節(jié)細

2、胞凋亡程度及內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度的改變，同時檢測視網(wǎng)膜中TNF-α與IL-1β表達的改變，探討如果小膠質(zhì)細胞對糖尿病視網(wǎng)膜神經(jīng)病變產(chǎn)生影響，以上兩種炎癥因子是否參與。
　　方法：
　　1.一次性腹腔注射STZ誘導1型糖尿病大鼠模型，在正常對照及糖尿病4周、8周、12周大鼠中，OX-42免疫組化染色觀察視網(wǎng)膜中小膠質(zhì)細胞的細胞形態(tài)、細胞密度、在視網(wǎng)膜各層分布、活化小膠質(zhì)細胞比率及其在視神經(jīng)中的分布；Real-timePCR法檢測視網(wǎng)

3、膜中Iba-1mRNA表達的改變。
　　2.正常對照及糖尿病3周、4周、5周大鼠給予玻璃體腔注射氯膦酸二鈉脂質(zhì)體，對側(cè)眼注射PBS作為對照，注射1周后通過OX-42免疫組化染色及細胞計數(shù)觀察氯膦酸二鈉脂質(zhì)體對視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞的清除作用；糖尿病3周大鼠給予玻璃體腔注射氯膦酸二鈉脂質(zhì)體，對側(cè)眼注射PBS作為對照，于注射2周、3周及4周后同樣方法觀察氯膦酸二鈉脂質(zhì)體對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞清除作用的持續(xù)時間。
　　3.正常對照

4、及糖尿病3周大鼠給予玻璃體腔注射氯膦酸二鈉脂質(zhì)體，對側(cè)眼注射PBS作為對照，3周后重復注射1次，于第2次玻璃體腔注射2周后，OX-42免疫組化染色標記視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞及Real-timePCR法檢測視網(wǎng)膜中Iba-1mRNA表達，觀察氯膦酸二鈉脂質(zhì)體對正常及糖尿病大鼠視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞的清除作用；NeuN免疫組化染色與細胞計數(shù)觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量的改變，NeuN免疫熒光與TUNEL共染色觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞凋亡程度的改變，視網(wǎng)膜切片H

5、E染色觀察內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度的改變；Real-timePCR法檢測視網(wǎng)膜中TNF-α與IL-1βmRNA表達的改變。
　　結(jié)果：
　　1.在糖尿病4周、8周及12周大鼠視網(wǎng)膜中部分小膠質(zhì)細胞呈阿米巴狀，或胞體顯著變大同時細胞突起變粗變短，細胞形態(tài)與正常視網(wǎng)膜中分枝狀的小膠質(zhì)細胞明顯不同；小膠質(zhì)細胞密度在正常與糖尿病各組大鼠之間沒有明顯區(qū)別；在正常與糖尿病各組大鼠，小膠質(zhì)細胞主要位于神經(jīng)纖維層/神經(jīng)節(jié)細胞層和內(nèi)叢狀層，糖尿病12周

6、大鼠視網(wǎng)膜中位于神經(jīng)纖維層/神經(jīng)節(jié)細胞層的小膠質(zhì)細胞比率較其他各組明顯升高，同時位于內(nèi)叢狀層的小膠質(zhì)細胞比率較其他各組明顯降低；糖尿病各組大鼠視網(wǎng)膜中活化小膠質(zhì)細胞的比率較正常對照組均明顯升高；小膠質(zhì)細胞在正常對照及糖尿病4周大鼠視神經(jīng)中沿神經(jīng)纖維呈縱行分布，在糖尿病8周及12周大鼠視神經(jīng)中，小膠質(zhì)細胞突起增多，縱行分布不明顯，出現(xiàn)紊亂；糖尿病8周及12周大鼠視網(wǎng)膜中Iba-1mRNA含量較正常對照組明顯升高。
　　2.氯膦酸二鈉

7、脂質(zhì)體經(jīng)玻璃體腔注射1周后，與對側(cè)PBS注射眼比較，正常對照大鼠視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞數(shù)量無明顯改變，糖尿病3周、4周、5周大鼠視網(wǎng)膜中小膠質(zhì)細胞數(shù)量明顯減少；糖尿病3周大鼠，經(jīng)氯膦酸二鈉脂質(zhì)體玻璃體腔注射2周、3周后，視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細胞數(shù)量較對側(cè)眼明顯減少，注射4周后小膠質(zhì)細胞數(shù)量與對側(cè)眼比較無明顯區(qū)別。
　　3.氯膦酸二鈉脂質(zhì)體經(jīng)玻璃體腔注射5周后，與對側(cè)PBS注射眼比較，正常對照及糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中小膠質(zhì)細胞數(shù)量均明顯減少，同時視網(wǎng)

8、膜Iba-1mRNA含量也明顯減少；糖尿病大鼠PBS注射眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量及內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度較正常大鼠PBS注射眼明顯減少，經(jīng)氯膦酸二鈉脂質(zhì)體注射5周后，正常大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量及內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度無明顯改變，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量及內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度較對側(cè)PBS注射眼明顯增加；糖尿病大鼠PBS注射眼視網(wǎng)膜TNF-αmRNA含量較正常大鼠PBS注射眼明顯升高，氯膦酸二鈉脂質(zhì)體注射5周后，正常對照及糖尿病大鼠視網(wǎng)膜TNF-αmRNA

9、含量較自身對側(cè)眼均明顯下降；糖尿病大鼠PBS注射眼視網(wǎng)膜IL-1βmRNA含量與正常大鼠PBS注射眼比較無明顯差異，氯膦酸二鈉脂質(zhì)體注射5周后，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜IL-1βmRNA含量較自身對側(cè)眼明顯下降。
　　結(jié)論：
　　1.小膠質(zhì)細胞在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中發(fā)生活化，表現(xiàn)為細胞形態(tài)改變、在視網(wǎng)膜中分布的改變及活化小膠質(zhì)細胞比率的增加；同時小膠質(zhì)細胞Iba-1mRNA表達增加。
　　2.氯膦酸二鈉脂質(zhì)體經(jīng)玻璃體腔注射能夠明