糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VEGF、PEDF表達(dá)與神經(jīng)細(xì)胞及血—視網(wǎng)膜屏障損傷的研究.pdf

1、糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabeticretinopathy，DR)是糖尿病致盲的主要原因，對(duì)于其發(fā)病機(jī)制及相應(yīng)治療方案的研究已成為熱點(diǎn)。目前有研究表明眼內(nèi)血管生成刺激因子與抑制因子的失衡是增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生的主要原因，熱點(diǎn)主要集中于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和色素上皮源性因子(pigmentepithelium-derivedfactor，PEDF)兩種拮抗性因子，

2、然而此兩種因子是否也在早期病變中發(fā)揮重要作用有待于進(jìn)一步研究。 目的:本研究擬以鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠為研究對(duì)象，檢測(cè)VEGF和PEDF在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中的動(dòng)態(tài)表達(dá)，同時(shí)觀察大鼠神經(jīng)視網(wǎng)膜及血—視網(wǎng)膜屏障病理改變的發(fā)生，探討非增殖期及臨床前期糖尿病視網(wǎng)膜微血管病變及神經(jīng)退行性病變的病理機(jī)制以及兩種生長(zhǎng)因子可能發(fā)揮的作用。 方法:選取130只健康SD大鼠，尾靜脈注射鏈脲佐菌素建立糖

3、尿病大鼠模型。根據(jù)飼養(yǎng)時(shí)間，隨機(jī)分為正常對(duì)照0.5月組(N0.5)、糖尿病0.5月組(DM0.5)、正常對(duì)照1月組(N1)、糖尿病1月組(DM1)、正常對(duì)照3月組(N3)、糖尿病3月組(DM3)、正常對(duì)照5月組(N5)及糖尿病5月組(DM5)。分別行RT-PCR、WesternBlot及免疫組織化學(xué)染色等實(shí)驗(yàn)方法，從mRNA及蛋白水平檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜VEGF、PEDF的表達(dá)豐度及部位。同時(shí)應(yīng)用免疫組化、TUNEL染色、透射電鏡及伊文思藍(lán)血

4、管通透性檢測(cè)法等方法從多個(gè)觀察角度定位、定性或定量糖尿病時(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)退行性改變及血—視網(wǎng)膜屏障的破壞情況。 結(jié)果:STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠高血糖狀態(tài)持久穩(wěn)定，表現(xiàn)為明顯的“三多一少”典型癥狀。 正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜有VEGFmRNA及蛋白的表達(dá)，DM0.5組表達(dá)開始增高(P＜0.05)，隨病程延長(zhǎng)，表達(dá)量逐漸增高，至DM5組視網(wǎng)膜VEGF表達(dá)量約為正常對(duì)照的2倍(P＜0.05)。 PEDFmRNA表達(dá)于正常大鼠視網(wǎng)

5、膜，DM1組表達(dá)開始減少，與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)，至DM5組視網(wǎng)膜表達(dá)量約為正常對(duì)照的1/2(P＜0.05)。PEDF蛋白在各組大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)與其mRNA表達(dá)趨勢(shì)一致。 PEDFmRNA及蛋白在正常對(duì)照各組間大鼠視網(wǎng)膜表達(dá)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 透射電鏡觀察顯示DM1組僅內(nèi)層神經(jīng)視網(wǎng)膜和色素上皮細(xì)胞發(fā)生輕微超微結(jié)構(gòu)損傷，隨糖尿病病程進(jìn)展，視網(wǎng)膜全層發(fā)生神經(jīng)退行性病變。神經(jīng)細(xì)胞的死亡部分以凋亡的形式

6、發(fā)生，部分以壞死的形式發(fā)生。凋亡細(xì)胞主要發(fā)生于內(nèi)層視網(wǎng)膜，隨病變進(jìn)展，表達(dá)增多。 伊文思藍(lán)法結(jié)果顯示糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管滲漏較正常大鼠增強(qiáng)，DM0.5組鼠即有增高(P＜0.05)，隨病程延長(zhǎng)，滲漏逐漸增強(qiáng)，至DM5組，伊文思藍(lán)滲漏量約為正常對(duì)照的6倍(P＜0.05)。 糖尿病大鼠內(nèi)、外血—視網(wǎng)膜屏障組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，DM1組大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及毛細(xì)血管超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，隨病變進(jìn)展，損傷加重。 糖尿病時(shí)同時(shí)伴有

7、脈絡(luò)膜超微結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)論:STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠是一種相對(duì)簡(jiǎn)單易行、可靠的模型制備方法。在發(fā)生臨床可見的糖尿病微血管病變前，糖尿病大鼠血—視網(wǎng)膜屏障已發(fā)生損傷，表現(xiàn)為超微結(jié)構(gòu)的改變及血管通透性的增高；同時(shí)伴有視網(wǎng)膜神經(jīng)退行性改變，表現(xiàn)為視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死樣改變。視網(wǎng)膜VEGF的正性表達(dá)增多與PEDF的負(fù)性表達(dá)減少，可能在早期糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病中發(fā)揮重要作用，促進(jìn)了病變發(fā)展。除視網(wǎng)膜病變外，還應(yīng)注意到有糖尿病脈絡(luò)