根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的胡蘿卜愈傷組織細(xì)胞表達(dá)人干擾素α-2b的研究.pdf

1、目的：將人干擾素α-2b(human interferonα-2b,hIFNα-2b)基因?qū)牒}卜愈傷組織細(xì)胞，探討植物細(xì)胞表達(dá)hIFNα-2b的可行性。
　　方法：將已構(gòu)建成功并保存于大腸桿菌DH5α中的人干擾素α-2b基因植物雙元表達(dá)載體pBI121-hIFNα-2b以?xún)鋈诜ㄞD(zhuǎn)化根瘤農(nóng)桿菌LBA4404感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)過(guò)卡那霉素和利福霉素的雙重篩選，選出陽(yáng)性菌落，并經(jīng)PCR鑒定質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化。利用植物離體培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)胡蘿卜愈傷組

2、織細(xì)胞，并通過(guò)根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法，用含有質(zhì)粒 pBI121-hIFNα-2b的農(nóng)桿菌感染胡蘿卜愈傷組織細(xì)胞，經(jīng)卡那霉素和頭孢霉素雙重篩選，選出轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性細(xì)胞。利用RT-PCR、Western Blotting檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞中hIFNα-2b基因的表達(dá)產(chǎn)物。
　　結(jié)果：經(jīng)RT-PCR與Western Blotting檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性細(xì)胞中存在hIFNα-2b基因的表達(dá)產(chǎn)物。
　　結(jié)論：本研究成功將hIFNα-2b基因?qū)?/p>