農(nóng)桿菌介導(dǎo)miR396基因?qū)Υ篼溣鷤M織的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、miRNAs是植物體內(nèi)一類(lèi)長(zhǎng)度在21個(gè)核苷酸左右、非編碼具有調(diào)控功能的小RNA分子，它們通過(guò)參與基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，在植物生長(zhǎng)發(fā)育和抗病抗逆方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。前人研究表明，miR396廣泛參與到植物的細(xì)胞分裂、葉片性狀形成、花器官變異和耐旱性等過(guò)程。為有效利用該優(yōu)良基因資源，本研究使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，將來(lái)源于水稻的miR396基因?qū)氪篼溨羞^(guò)量表達(dá)，以期獲得性狀變異的優(yōu)良轉(zhuǎn)基因植株，尤其是在耐旱性方面表現(xiàn)突出的材料。文中

2、選取了6個(gè)大麥品種的幼胚愈傷組織和3個(gè)品種的成熟胚愈傷組織進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，以抗潮霉素hptⅡ基因?yàn)楹Y選標(biāo)記，成功獲得了部分含有目的基因Os-miR396的不同大麥品種的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株，同時(shí)對(duì)大麥轉(zhuǎn)基因過(guò)程的影響因素進(jìn)行了分析和優(yōu)化，主要結(jié)果如下:
　　(1)基因型的差異依然是影響幼胚和成熟胚愈傷誘導(dǎo)率的主要因素;
　　(2)當(dāng)成熟胚采用只接種盾片誘導(dǎo)時(shí)，不需要添加ABA便可有效減少發(fā)芽率，添加ABA反而會(huì)抑制愈傷生長(zhǎng)發(fā)育;

3、>　　(3)相同潮霉素濃度對(duì)不同品種幼胚愈傷的分化篩選效果存在差異，25mg/L的潮霉素劑量對(duì)美里黃金、華大麥4號(hào)和華大麥7號(hào)而言篩選壓可能過(guò)高，對(duì)愈傷的生長(zhǎng)及增殖可能有著不良影響;
　　(4)不同濃度的Timentin抑菌效果不同，當(dāng)侵染濃度高時(shí)，需要提高Timentin的濃度才能很好的抑制農(nóng)桿菌的污染;
　　(5)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)幼胚愈傷轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，得到17株抗性大麥植株，經(jīng)PCR檢測(cè):miR396基因陽(yáng)性株為5株，分別為