農(nóng)桿菌介導miR396基因對大麥愈傷組織的遺傳轉化.pdf

1、miRNAs是植物體內一類長度在21個核苷酸左右、非編碼具有調控功能的小RNA分子，它們通過參與基因的轉錄后調控，在植物生長發(fā)育和抗病抗逆方面發(fā)揮著至關重要的作用。前人研究表明，miR396廣泛參與到植物的細胞分裂、葉片性狀形成、花器官變異和耐旱性等過程。為有效利用該優(yōu)良基因資源，本研究使用農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化技術，將來源于水稻的miR396基因導入大麥中過量表達，以期獲得性狀變異的優(yōu)良轉基因植株，尤其是在耐旱性方面表現(xiàn)突出的材料。文中

2、選取了6個大麥品種的幼胚愈傷組織和3個品種的成熟胚愈傷組織進行遺傳轉化，以抗潮霉素hptⅡ基因為篩選標記，成功獲得了部分含有目的基因Os-miR396的不同大麥品種的轉基因陽性株，同時對大麥轉基因過程的影響因素進行了分析和優(yōu)化，主要結果如下:
　　(1)基因型的差異依然是影響幼胚和成熟胚愈傷誘導率的主要因素;
　　(2)當成熟胚采用只接種盾片誘導時，不需要添加ABA便可有效減少發(fā)芽率，添加ABA反而會抑制愈傷生長發(fā)育;

3、>　　(3)相同潮霉素濃度對不同品種幼胚愈傷的分化篩選效果存在差異，25mg/L的潮霉素劑量對美里黃金、華大麥4號和華大麥7號而言篩選壓可能過高，對愈傷的生長及增殖可能有著不良影響;
　　(4)不同濃度的Timentin抑菌效果不同，當侵染濃度高時，需要提高Timentin的濃度才能很好的抑制農(nóng)桿菌的污染;
　　(5)農(nóng)桿菌介導法對幼胚愈傷轉化實驗中，得到17株抗性大麥植株，經(jīng)PCR檢測:miR396基因陽性株為5株，分別為