硫化氫對慢性應(yīng)激誘導海馬神經(jīng)損傷的保護作用.pdf

1、目的：長期慢性應(yīng)激導致下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic-pituitary-adre nocorti-cal, HPA)軸功能亢進、興奮性氨基酸(excitatoryaminoacid, EAA)生成過多等，引起氧化應(yīng)激，誘導海馬神經(jīng)元凋亡，最終引起抑郁、焦慮樣等癥狀出現(xiàn)。如何防止慢性應(yīng)激所致海馬神經(jīng)的損傷，對防治慢性應(yīng)激所致精神情感異常具有重要意義。硫化氫(hydrogen sulphide, H2S)作為一種新型氣體

2、信號分子具有神經(jīng)調(diào)節(jié)功能和神經(jīng)保護作用。本研究擬建立慢性非預(yù)期溫和型應(yīng)激(Chronic Unpredictable Mild Stress，CUMS)模型，探討H2S對慢性應(yīng)激導致海馬神經(jīng)損傷的保護作用及其機制。
　　方法：⑴將大鼠隨機分為對照組、CUMS組、CUMS+低濃度NaHS(1.68mg/kg)組、CUMS+高濃度 NaHS組(5.6mg/kg)；建立慢性非預(yù)期溫和型應(yīng)激(Chronic Unpredictable M

3、ild Stress，CUMS)模型；⑵亞甲基藍法檢測海馬組織內(nèi)源性H2S的生成；⑶HE染色觀察海馬CA3區(qū)細胞排列情況及細胞形態(tài)；⑷利用Tunel法檢測海馬區(qū)神經(jīng)細胞凋亡情況；⑸應(yīng)用Elisa法測海馬組織 Klotho蛋白表達情況；⑹Brdu免疫組織化學染色檢測大鼠海馬神經(jīng)元再生。
　　結(jié)果：①慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周后，灌流，固定腦組織，將腦組織進行石蠟切片(5um)，進行 HE染色，結(jié)果顯示，CUMS組大鼠海馬

4、CA3區(qū)細胞較對照組排列紊亂，細胞間隙增大，有神經(jīng)細胞的缺失；CUMS+低濃度NaHS組、CUMS+高濃度 NaHS組海馬 CA3區(qū)較 CUMS組細胞排列緊密、整齊，表明外源性 H2S能減 CUMS引起的神經(jīng)細胞損傷。②慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周后，灌流，固定腦組織，將腦組織進行石蠟切片(5um)，進行 Tunel染色，結(jié)果顯示，CUMS組大鼠海馬 CA3區(qū)凋亡細胞較對照組增多(電鏡下凋亡細胞胞核呈深棕色)，CUMS+低濃度N

5、aHS組、CUMS+高濃度 NaHS組海馬 CA3區(qū)凋亡細胞較 CUMS組明顯減少，結(jié)果表明外源性 H2S可抑制 CUMS誘導 CA3區(qū)細胞凋亡。③慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周后，斷頭取腦組織，分離出海馬，對海馬組織進行勻漿，制成10％腦組織勻漿。Elisa法測海馬 Klotho蛋白表達，結(jié)果顯示，CUMS組 Klotho蛋白表達較對照組明顯降低，CUMS組經(jīng)外源性 H2S處理后，海馬 Klotho蛋白表達明顯上調(diào)，表明 CUM

6、S可抑制海馬 Klotho蛋白的表達，外源性 H2S可逆轉(zhuǎn) CUMS對 Klotho蛋白表達的下調(diào)。④慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周后，斷頭取腦組織，分離出海馬，對海馬組織進行勻漿，制成10％腦組織勻漿，亞甲基藍法檢測海馬內(nèi)源性 H2S的生成。結(jié)果顯示 CUMS可顯著抑制內(nèi)源性 H2S的生成，外源性 H2S可逆轉(zhuǎn) CUMS對海馬內(nèi)源性 H2S生成的抑制作用。⑤慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周，并在應(yīng)激的最后一周腹腔注射 Brd