硫化氫后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、肝臟缺血再灌注損傷(Hepatic Ischemia-Reperfusion，HIRI)是一種常見的臨床病理生理過程，休克、感染、肝臟外傷、肝葉切除及肝移植所致的肝臟功能損害、衰竭都與之有關(guān)。肝臟缺血再灌注損傷機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全認(rèn)識(shí)清楚，大量研究證明主要與缺血再灌注過程中氧自由基釋放、肝臟能量代謝障礙、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、微循環(huán)功能障礙、細(xì)胞因子、線粒體功能異常、Kupffer細(xì)胞激活及中性粒細(xì)胞的活化等因素有關(guān)。目前，圍手術(shù)期肝臟缺

2、血再灌注損傷的防治策略包括低溫、改良外科技術(shù)、藥物防治、缺血及藥物預(yù)處理、基因治療等方面。但迄今為止，上述眾多的策略尚未妥善解決臨床肝臟缺血再灌注所致的肝功能不全。氣體信號(hào)分子是近年來研究的一個(gè)熱點(diǎn)，近期研究表明硫化氫(hydrogen sulfide，H2S)廣泛存在于哺乳動(dòng)物組織，其不僅在生理?xiàng)l件下參與機(jī)體的功能調(diào)節(jié)，而且還參與許多疾病的病理過程，其在缺血再灌注過程中的作用也日益受到重視。目前硫化氫對心血管和神經(jīng)系統(tǒng)的缺血再灌注損傷

3、研究較多，而在肝臟缺血再灌注損傷中是否同樣具有保護(hù)作用鮮有報(bào)道。
　　本研究以大鼠肝缺血再灌注模型為基礎(chǔ)，通過評價(jià)不同劑量硫化氫后處理對肝臟缺血再灌注損傷的影響，應(yīng)用ATP敏感性鉀通道阻滯劑后對硫化氫后處理保護(hù)作用的影響，以及硫氧還蛋白系統(tǒng)在硫化氫后處理減輕肝臟缺血再灌注損傷中的變化，探討硫化氫后處理對肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制。
　　一、硫化氫后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響
　　目的：探討硫化氫后處理

4、對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響。
　　方法：健康雄性SD大鼠30只，質(zhì)量220～250g，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組(n=6)，假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(IR組)和不同劑量硫化氫組(H2S1～3組)。Sham組僅暴露肝門，不夾閉動(dòng)、靜脈；IR組采用夾閉左、中葉肝蒂、門靜脈和肝動(dòng)脈支60min，然后松開夾閉恢復(fù)灌注的方法制備大鼠肝缺血再灌注模型；H2S1～3組于再灌注前5min分別腹腔注射14、28、56μmol·kg-1硫

5、氫化鈉。各組于再灌注6h抽取下腔靜脈血樣并取肝組織，采用全自動(dòng)生化分析儀測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，采用二硫代二硝基苯甲酸法測定肝組織谷胱甘肽(GSH)含量，光鏡下觀察肝組織病理學(xué)變化。
　　結(jié)果：與Sham組相比，IR組血清ALT和AsT活性升高，肝組織GSH含量下降(P<0.05)：與IR組相比，H2S1～3組ALT和AST活性降低，肝組織GSH含量升高(P<0.05)；H2S1～3組肝病理學(xué)損傷較

6、IR組明顯減輕。
　　結(jié)論：硫化氫后處理可減輕大鼠肝缺血再灌注損傷。
　　二、ATP敏感性鉀通道在硫化氫后處理減輕大鼠肝缺血再灌注損傷中的作用
　　目的：評價(jià)ATP敏感性鉀通道在硫化氫后處理減輕大鼠肝缺血再灌注損傷中的作用。
　　方法：健康雄性SD大鼠30只，質(zhì)量220～250g，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組(n=6)，假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(IR組)、硫化氫組(NaHS組)、格列本脲組(Gli組)和5

7、-羥基葵酸組(5-HD組)。Sham組僅暴露肝門，不夾閉動(dòng)、靜脈；IR組采用夾閉左、中葉肝蒂、門靜脈和肝動(dòng)脈支60min，然后松開夾閉恢復(fù)灌注的方法制備大鼠肝缺血再灌注模型；H2S組于再灌注前5min腹腔注射28μmol·kg-1硫氫化鈉；Gli組于硫氫化鈉給藥前5 min腹腔注射非選擇性ATP敏感性鉀通道阻斷劑格列本脲6 mg·kg-1，5-HD組于硫氫化鈉給藥前5 min腹腔注射選擇性線粒體ATP敏感性鉀通道阻斷劑5-羥基葵酸10m

8、g·kg-1。各組于再灌注6h抽取下腔靜脈血樣并取肝組織，采用全自動(dòng)生化分析儀測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，采用雙抗體夾心ELISA法測定肝組織腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量，采用比色法測定肝組織髓過氧化物酶(MPO)含量，光鏡下觀察肝組織病理學(xué)變化。
　　結(jié)果：與Sham組比較，IR組血清ALT和AST活性升高，肝組織TNF-α和MPO含量上升(P<0.01)；與IR組比較，H2S組血清ALT、AST

9、活性和肝組織TNF-α、MPO含量降低(P<0.01)，肝病理學(xué)損傷減輕；與H2S組比較，Gli組和5-HD組血清ALT、AST活性和肝組織TNF-α、MPO含量升高(P<0.01)，肝病理學(xué)損傷加重。
　　結(jié)論：ATP敏感性鉀通道的開放參與了硫化氫后處理減輕大鼠肝缺血再灌注損傷。
　　三、硫氧還蛋白系統(tǒng)在硫化氫后處理減輕大鼠肝缺血再灌注損傷中的變化
　　目的：通過評價(jià)硫氧還蛋白系統(tǒng)在硫化氫后處理減輕大鼠肝缺血再灌注損

10、傷中的變化，探討硫化氫后處理減輕大鼠肝缺血再灌注損傷的可能機(jī)制。
　　方法：健康雄性SD大鼠18只，質(zhì)量220～250g，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組(n=6)，假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(IR組)、硫化氫組(NaHS組)。S組僅暴露肝門，不夾閉動(dòng)、靜脈；IR組采用夾閉左、中葉肝蒂、門靜脈和肝動(dòng)脈支60min，再恢復(fù)灌注的方法制備大鼠肝缺血再灌注模型；H2S組于再灌注前5 min腹腔注射28μmol·kg-1硫氫化鈉。各組于

11、再灌注6h取肝組織，采用雙抗體夾心ELISA法檢測硫氧還蛋白酶(Trx)、硫氧還蛋白還原酶(TrxR)活性，采用Western-blot技術(shù)檢測Trx系統(tǒng)蛋白和硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)表達(dá)。
　　結(jié)果：與Shmn組比較，IR組Trx活性下降和Trx1蛋白表達(dá)下調(diào)，TXNIP蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)；與IR組比較，H2S組Trx活性升高和Trx1蛋白表達(dá)上調(diào)，TXNIP蛋白表達(dá)下調(diào)(P<0.05)。
　　結(jié)論：