硫化氫對LPS致小鼠急性肺損傷的保護及機制研究.pdf

1、目的:
　　急性肺損傷(acute lung injury，ALI)是多種繁雜病因造成的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞的損傷，伴有不斷加重的低氧血癥和ARDS。ALI具有病死率高、治療困難、預(yù)后差等特點，尋找有效的ALI治療靶點仍然是目前危重病醫(yī)學(xué)亟待解決的關(guān)鍵問題之一。H2S被視為和CO、NO一類的第三種氣態(tài)遞質(zhì)。前期研究發(fā)現(xiàn)，在肢體損傷導(dǎo)致的遠隔肺損傷中，肺H2S產(chǎn)生減少、循環(huán)H2S濃度降低，給以外源性H2S供體NaHS可減輕

2、肢體損傷導(dǎo)致的肺損傷。大量文獻報道，外源性H2S可減輕高壓氧、LPS、缺血再灌注、機械通氣引起的肺損傷。但是，H2S在LPS誘發(fā)小鼠ALI中發(fā)揮保護效用的機制尚未闡明。本研究通過經(jīng)氣管內(nèi)注射LPS來構(gòu)建小鼠ALI模型，檢測炎癥因子、H2S、內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcel，EPCs)、肺巨噬細(xì)胞(alveolar macrophage，AM)等在ALI小鼠體內(nèi)的含量變化，觀察H2S對于ALI損傷程度的影響，探

3、討:①H2S對EPCs動員和再內(nèi)皮化的作用，②H2S與ALI肺內(nèi)AM表型轉(zhuǎn)化的關(guān)聯(lián)，為ALI的治療提供新的解決思路。
　　方法:
　　1.氣管內(nèi)注射LPS構(gòu)建小鼠ALI模型。
　　2.肉眼下比較各組小鼠肺大體標(biāo)本，光學(xué)顯微鏡下比較肺病理學(xué)改變，測定肺系數(shù)和肺病理學(xué)評分。
　　3.測定不同時相點各組小鼠血清炎癥因子IL-6、IL-8和TNF-α濃度。
　　4.測定各組小鼠血清H2S在不同時相點的濃度。

4、　　5.檢測各組小鼠肺組織CD34和VEGFR2的表達，計數(shù)CD34+/VEGFR2+細(xì)胞數(shù)目。
　　6.檢測各組小鼠肺組織iNOS和Arginase的表達。
　　結(jié)果:
　　1.成功建立ALI模型:LPS組各時相點肺組織呈現(xiàn)不同程度的毛細(xì)血管上皮和肺泡壁破壞、肺泡壁和肺間質(zhì)顯著增厚，肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)大量紅細(xì)胞滲出和炎性細(xì)胞浸潤;與Sham組相比，肺系數(shù)、IQA評分顯著升高。
　　2.LPS組第3天肺大體標(biāo)本的出

5、血面積顯著大于其它時相點，肺組織肺間質(zhì)增厚、紅細(xì)胞滲出和炎性細(xì)胞浸潤程度最為嚴(yán)重，肺系數(shù)和IQA病理學(xué)評分高于其他時相點。
　　3.NaHS組小鼠肺組織IQA值及肺系數(shù)比LPS組顯著降低，PAG組和AOAA組小鼠肺組織IQA值及肺系數(shù)比LPS組顯著升高。
　　4.ALI小鼠血清H2S濃度顯著減少，NaHS組血清H2S濃度比LPS組顯著增加。
　　5.NaHS組小鼠肺組織CD34和VEGFR2表達較LPS組顯著增多，CD

6、34+/VEGFR2+細(xì)胞數(shù)目顯著增加。
　　6.NaHS組肺組織中Arginase/iNOS比值較LPS組顯著升高。
　　結(jié)論:
　　1.通過氣管內(nèi)滴注LPS構(gòu)建小鼠ALI模型的方法具有重復(fù)性好，穩(wěn)定性強的優(yōu)點。為進一步研究ALI相關(guān)生理病理機制提供穩(wěn)定的動物模型基礎(chǔ)。
　　2.LPS氣管內(nèi)滴注后第3天是ALI小鼠肺損傷最嚴(yán)重的時間節(jié)點，因此作為后續(xù)研究H2S對ALI的作用及機制的時相點。
　　3.外源性