不同證候食管癌自身抗原鑒定.pdf

1、　　目的
　　本項目用不同證型食管癌患者血清、手術切除癌組織標本以及正常血清為研究對象,運用病人自身血清篩選自身抗原,從中醫(yī)各證型食管癌患者癌組織中鑒定、分析和比較出食管癌癌變階段自身抗原,為食管癌中醫(yī)證候分子病機的闡明及診斷和治療提供可靠依據(jù)。
　　方法
　　按照中醫(yī)辨證標準收集痰氣交阻型、瘀血內結型、津虧熱結型和氣虛陽微型四種中醫(yī)證型食管癌患者組織樣品,運用一維電泳分離患者癌組織蛋白,用患者血清和正常血清為一

2、抗進行Western blot反應,找出特異條帶,再運用二維凝膠電泳分離患者癌組織蛋白,制備三套凝膠,兩套分別用患者血清和正常血清為一抗進行免疫印跡反應,二者免疫印跡點比對,找出患者組特異顯色點,一套用硝酸銀染色,挖取染色凝膠上特異顯色點對應的蛋白點,將挖取的蛋白樣品用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)分析,所得結果在 NCBI數(shù)據(jù)庫(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)中搜索,獲得蛋白的

3、名稱及功能,對其進行相關性分析。
　　結果
　　1.進一步改進SERPA技術,四個證型共獲得一維電泳患者血清為一抗免疫印跡圖像4張、二維電泳分別用患者和正常血清為一抗免疫印跡圖像 8張、膠用硝酸銀染色圖像8張,為特異蛋白的鑒定奠定基礎。
　　2.每個證型4幅圖片進行對比,共獲得8個特異蛋白點,其中痰氣交阻證 1個,編號為1號；瘀血內結證3個,編號為2號、2上、2下；津虧熱結證3個,編號為3號、3左、3右；氣虛陽微

4、證1個,編號為4號。
　　3.經(jīng)質譜分析得到7種特異表達蛋白質,1號為keratin, type I cytoskeletal 13；2號為caldesmon；2上為tumor rejection antigen (gp96) 1 variant、2下為heat shock protein gp96 precursor；3號為 actin, gamma 2, smooth muscle, enteric, isoform CRA

5、_a；3左、3右均為Keratin 13；4號為Keratin, type I cytoskeletal 16,所有蛋白質鑒定得分均大于 63分,有統(tǒng)計學意義。
　　結論
　　1.改進了SERPA技術。
　　2.本課題得到7種蛋白質,其中 caldesmon； tumor rejection antigen (gp96) 1 variant ；heat shock protein gp96 precursor；a