不同證候食管癌組織差異蛋白組學研究.pdf

1、　　目的本研究運用蛋白組學技術鑒定不同證候食管鱗癌組織、癌旁組織和正常食管粘膜組織差異表達蛋白質(zhì),尋找食管癌不同階段和不同證候相關表達蛋白,探討食管鱗癌的癌變機理和食管鱗癌證候發(fā)生分子病機。
　　方法按照標準收集痰氣交阻型( P)、瘀血內(nèi)結(jié)型( B)、津虧熱結(jié)型( F)和氣虛陽微型( Q)四種中醫(yī)證型食管癌患者病例樣品,采用雙向凝膠電泳(2-DE)技術電泳分離患者癌組織、癌旁組織與正常食管組織組織蛋白,利用 ImageMaste

2、r 2D Platinum 軟件對凝膠圖像進行蛋白點的尋點、定量和匹配及統(tǒng)計分析,在此我們認定百分比灰度(%Volume)大于 2 倍且具有重復性的蛋白點是差異蛋白點。蛋白樣品用 4700 串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀[4700 Proteomics Analyzer (TOF/TOFTM) (Applied Biosystems , USA)]進行質(zhì)譜分析,所得結(jié)果用 GPS(Applied Biosystems, USA) –MASCOT (

3、Matrix Science, London, UK)進行數(shù)據(jù)庫檢索。
　　結(jié)果1 進一步改進食管癌組織蛋白質(zhì)樣品的提取制備技術方法,獲得了圖像清晰、重復性較好的不同證型食管癌正常組織、癌旁組織與正常組織雙向凝膠電泳圖像 12 張,為鑒定分析食管癌發(fā)生相關聯(lián)蛋白奠定前期基礎。
　　2 從食管癌癌組織、癌旁組織和正常組織之間篩選出差異蛋白 44 個2 9 種,其中癌組織與癌旁組織差異蛋白 1 3 個,1 0 個上升表達,3

4、 個表達下降；癌組織與正常粘膜差異蛋白 14 個,其中 7 個上升表達, 7 個表達下降；癌旁組織與正常組織比較發(fā)現(xiàn)差異蛋白 17 個,其中 8 個上升表達, 9 個表達下降。
　　3 不同證型食管癌組織之間：P 組與 B 組,P組癌組織中蛋白表達上調(diào) 2 種,未發(fā)現(xiàn)下調(diào)蛋白；癌旁組織中表達上調(diào)蛋白 2 種,下調(diào) 6 種；正常組織中表達上調(diào)蛋白1種,下調(diào) 4 種。P 組與F組比較,P組表達上調(diào)蛋白 3 種,下調(diào)蛋白 2 種；癌旁

5、組織中表達上調(diào)蛋白1種,下調(diào)12種；正常組織中表達上調(diào)蛋白1種,下調(diào) 8 種。P 組與 Q 組比較,P 組癌組織表達上調(diào)蛋白1種,下調(diào)蛋白 6 種；癌旁組織中表達上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 12 種；正常組織中表達上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 8 種。B組與F組比較,B組癌組織表達上調(diào)蛋白 2 種,下調(diào)蛋白 2 種；癌旁組織中表達上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 4 種；上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 4 種。B 組與 Q 組比較,B組癌組織中表達上調(diào)蛋白 2 種

6、,下調(diào)蛋白 2 種；癌旁組織中下調(diào)蛋白有 4種,未發(fā)現(xiàn)上調(diào)蛋白；正常組織中上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 8 種。F 組與 Q 組比較,F 組癌組織表達上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào)蛋白 6 種；癌旁組織中下調(diào)蛋白 2 種,上調(diào)蛋白 2 種；正常組織中表達上調(diào)蛋白 3 種,下調(diào) 2 種。
　　4 對食管癌不同階段篩選出的蛋白進行信號通路分析,篩選出的主要 信 號 通 路 為 Hypertrophic cardiomyopathy (HCM) 、

7、 Dilated cardiomyopathy phath way、和 Vascular smooth muscle contraction Pathway 通路相關,另外,對存在的差異蛋白進行 GO 富集分析,將其分子功能、生物過程進行研究,選取 p-value 小于 0.05 為有意義的目標,發(fā)現(xiàn)不同證型食管癌各自主要與細胞骨架結(jié)構、蛋白磷酸化、乙?；被Y(jié)束、鈣結(jié)合調(diào)節(jié)等功能相關
　　結(jié)論1 食管癌不同階段有差異表達蛋白。

8、主要涉及到激活蛋白激酶 C 通路( PKC)-肌球蛋白磷酸酶抑制劑參與通路、活化 T 細胞因子通路、細胞粘附信號通路、鈣調(diào)蛋白( CAM )核因子活化的 T 細胞信號傳導等通路。
　　2 不同證候食管癌組織有差異表達蛋。其信號傳導通路主要涉及血管平滑肌收縮通路、肥厚型心肌病( HCM)通路等信號傳導通路；能夠初步證明蛋白表達與證型的相關性。痰氣交阻證型組中蛋白表達主要與細胞骨架功能、細胞凋亡、蛋白磷酸化等相關；瘀血內(nèi)結(jié)型蛋白功能