視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中鹽皮質(zhì)激素受體的激活及其阻斷劑的視神經(jīng)保護(hù)作用.pdf

1、前言
　　 腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)在血壓調(diào)節(jié)以及電解質(zhì)平衡等方面具有重要作用。近年來,許多研究結(jié)果證實(shí),除了傳統(tǒng)概念所指的RAAS系統(tǒng)之外,在一些組織器官內(nèi)還存在著局部RAAS系統(tǒng),其中包括眼睛。尤其在視網(wǎng)膜內(nèi),已有研究在視網(wǎng)膜內(nèi)分離出了包括腎素,血管緊張素,血管緊張素轉(zhuǎn)化酶等的mRNA,而這些都是RAAS系統(tǒng)的重要組成成分。因此,RAAS系統(tǒng)在眼內(nèi),尤其是視網(wǎng)膜內(nèi)必定起著重要的作用,并且這一作用是獨(dú)立于經(jīng)典概

2、念中存在于血液中的RAAS系統(tǒng)的作用。盡管目前關(guān)于眼部RAAS系統(tǒng)的相關(guān)研究報(bào)道已不占少數(shù),但是大多數(shù)研究都主要圍繞血管緊張素Ⅱ(AngⅡ),目前很少有研究針對(duì)其下游產(chǎn)物醛固酮(Aldosterone)以及其受體鹽皮質(zhì)激素受體(MR),因此本實(shí)驗(yàn)擬研究這兩者在視網(wǎng)膜缺血再灌注損失的模型下的作用。
　　 研究方法
　　 采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為缺血損傷組,假手術(shù)對(duì)照組以及空白對(duì)照組。缺血損傷組分為醛固酮組,螺內(nèi)酯組,安慰

3、劑組,其中醛固酮組包括醛固酮(全身給藥)組,醛固酮(局部給藥)組,醛固酮(全身給藥)與坎地沙坦聯(lián)合給藥組,醛固酮(局部給藥)與坎地沙坦聯(lián)合給藥組,螺內(nèi)酯組根據(jù)給藥濃度高低分為1mg/kg/d組,10mg/kg/d組,100mg/kg/d組及螺內(nèi)酯(10mg/kg/d)與坎地沙坦聯(lián)合給藥組。
　　 1.采用升高眼壓法制作缺血再灌注模型:將眼內(nèi)壓升高至130mmHg并持續(xù)45分鐘,7天后處死取材,HE染色觀察視網(wǎng)膜各層厚度變化;

4、r>　　 2.采用上丘注射熒光染料法逆行標(biāo)記視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs),7d后處死大鼠并制備視網(wǎng)膜鋪片,熒光顯微鏡下觀察RGCs數(shù)量:
　　 3.通過測(cè)量視網(wǎng)膜各層厚度及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)估視網(wǎng)膜損傷情況。
　　 4.WesternBlot法檢測(cè)并比較缺血再灌注損傷后不同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜內(nèi)MR表達(dá)情況
　　 5.應(yīng)用Dunnett's多重比較及Student'st檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)數(shù)據(jù)。
　　 結(jié)果

5、r>　　 通過對(duì)比各組中缺血損傷眼于正常對(duì)照眼的視網(wǎng)膜厚度及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量發(fā)現(xiàn):在坎地沙坦組,螺內(nèi)酯(10mg/kg/d)組,及坎地沙坦聯(lián)合螺內(nèi)酯組給藥組中發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜缺血損傷得到了顯著的抑制;在坎地沙坦與醛固酮聯(lián)合給藥組中視網(wǎng)膜缺血損傷并未得到抑制,即醛固酮的加入阻斷了坎地沙坦的保護(hù)作用;在單獨(dú)給予醛固酮的缺血損傷組中,視網(wǎng)膜缺血損傷未得到抑制。在非缺血損傷組中玻璃體局部注射醛固酮可使得視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量顯著減少,但視網(wǎng)膜厚度無明顯