全肝缺血再灌注致大鼠肺臟損傷及其防護的實驗研究.pdf

1、背景和目的：
　　 肝臟移植術(shù)、肝臟大部切除術(shù)臨床上極為常見，術(shù)中造成全肝缺血再灌注損傷，勢必給其它遠隔臟器帶來損傷，肝缺血及門靜脈瘀血可產(chǎn)生大量有害介質(zhì)，在肝血流恢復(fù)后經(jīng)由心臟立即傾注入肺，造成急性肺損傷，給移植成功帶來了巨大的困難，嚴重影響著術(shù)后病人的存活率。
　　 本實驗通過手術(shù)方法建立大鼠全肝缺血再灌注模型，從術(shù)后肺臟結(jié)構(gòu)及功能改變，肺內(nèi)各類致傷因子的動態(tài)變化，以及鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶、硫化氫/胱硫醚-γ-裂解酶、水通

2、道蛋白、線粒體能量代謝的改變等方面，較全面研究創(chuàng)傷后肺損傷的發(fā)病機制。并應(yīng)用硫氫化鈉、他克莫司、螺內(nèi)酯、甲潑尼龍進行干預(yù)，進一步研究術(shù)后肺臟損傷的機制及藥物的作用途徑，以尋找有效的干預(yù)措施。
　　 本實驗分為兩部分：一、全肝缺血再灌注致大鼠肺臟損傷機制及藥物干預(yù)對其影響；二、全肝缺血再灌注大鼠肺臟損傷的線粒體機制及其藥物干預(yù)。
　　 方法：通過手術(shù)方法建立大鼠全肝缺血再灌注的創(chuàng)傷模型。
　　 第一部分：雄性Wis

3、tar大鼠184只，隨機分為23組，每組8只：正常對照組、缺血20min再灌注0h、2h、6h、12h、24h、48h、72h組、缺血40分鐘再灌注0h、6h、72h組；FK-506、MP、NaHs、Spiron空白對照組及20min+6h干預(yù)組；MP、spiron 40min+6h及40min+72h干預(yù)組。第二部分：雄性、Wistar大鼠80只，隨機分為10組，每組8只：正常對照組、缺血20min再灌注6h組、FK-506、MP、N

4、aHS、Spiron空白對照組及20min+6h干預(yù)組。
　　 動態(tài)檢測各組大鼠血漿硫化氫（H2S）、丙二醛（MDA）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-8（IL-8）的變化，檢測肺臟濕干重比值、CSE活性，細胞間粘附分子（ICAM-1）、核因子NF-κB、IL-8、AQP1含量，鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（CaN）含量、活性及mRNA表達，測定線粒體呼吸功能、膜電位及粒體酶的變化，觀察光鏡

5、及電鏡下肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分：與正常對照組比較，缺血20min再灌注組，血清TNF-α、血清及肺臟IL-8、血漿MDA、血漿AngⅡ、血漿H2S、肺臟W/D、ICAM-1、NF-κB水平在缺血期即開始升高，再灌注后持續(xù)升高，于再灌注2-12h之間各達到峰值后降低；肺臟AQP1蛋白表達缺血再灌注后逐漸降低，于再灌注6h時降到最低值；肺臟CSE、血漿及肺臟ALD、肺臟CaN含量、活性及mRNA

6、表達缺血再灌注后升高，分別于2h、6-12h出現(xiàn)兩次峰值后逐漸下降，多數(shù)監(jiān)測指標于再灌注后72h恢復(fù)至接近正常值水平；光鏡及電鏡結(jié)果顯示缺血再灌注后6h肺臟組織損傷最為嚴重。缺血40min再灌注組表現(xiàn)相同的變化趨勢，大多數(shù)指標變化程度較缺血20min相應(yīng)組更為顯著，肺組織損傷較缺血20min組更為嚴重；應(yīng)用FK506、Spiron、MP、NaHs藥物干預(yù)后，觀察到創(chuàng)傷最重時間點的肺組織各項指標出現(xiàn)不同程度改善，提示藥物對肺組織損傷起到了

7、不同程度的保護作用。第二部分：與正常對照組比較，缺血再灌注后，肺臟線粒體ATP酶活性改變，RCR、P/O、膜電位均降低，應(yīng)用FK506、Spiron、MP、NaHS藥物干預(yù)后，各項指標均有不同程度的改善。
　　 結(jié)論：
　　 全肝缺血再灌注模型中，缺血和再灌注兩個階段均可造成肺臟損傷，且隨缺血時間延長，肺組織損傷加重，肺臟損傷以再灌注6h損傷最為嚴重。各種致傷因子作用于肺組織引起損傷，損傷過程中，鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶、內(nèi)源性H