硅啉酸所致HD兔模型腦部NOS活性的變化及l(fā)-NNA對NOS陽性神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、亨廷頓舞蹈?。℉D）是一種人類常染色體顯性遺傳病，致病患者有不自主舞蹈樣動作和進(jìn)行性認(rèn)知障礙，最終導(dǎo)致癡呆甚至死亡，此病廣泛分布于世界各地，以歐美白種人受累為多。一氧化氮(NO)是一種信使分子，介導(dǎo)了多種生理功能，它在一氧化氮合酶(NOS)的催化下，由L-精氨酸氧化產(chǎn)生:O2+L-ArgNOS→NO+胍氨酸。
　　本試驗(yàn)選取3月齡健康哈白兔60只，體重(2300±200)g，隨機(jī)分為正常對照組、模型組、L-NNA治療組和鹽酸硫必利

2、治療組4組，每組15只。利用腦立體定位技術(shù)于右側(cè)紋狀體注射6μL(240nmol/μL)喹啉酸，制作兔HD模型，然后用NOS抑制劑Nω-硝基-L-精氨酸(L-NNA)和鹽酸硫必利對造模成功的HD兔進(jìn)行比較治療。
　　運(yùn)用行為學(xué)及免疫組織化學(xué)方法對HD模型進(jìn)行檢測。行為學(xué)測試結(jié)果顯示，本試驗(yàn)制備的亨廷頓舞蹈病模型在術(shù)后24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)右側(cè)旋轉(zhuǎn)、翻滾等急性興奮性毒性行為;HE切片中可看到神經(jīng)元缺失和膠質(zhì)細(xì)胞增生，免疫組化檢測結(jié)果顯示對照

3、組的額葉、紋狀體中有豐富的形狀為圓形或橢圓形的鈣結(jié)合蛋白(calbindin)免疫陽性神經(jīng)元，中等大小，胞體輪廓清晰，染色較深，免疫陽性反應(yīng)主要集中在核周的胞漿;而模型組的額葉和紋狀體中calbindin免疫陽性神經(jīng)元數(shù)量與對照組相比數(shù)量明顯減少，胞體輪廓變模糊。
　　通過硝酸還原酶法和生化方法檢測各組家兔的血清和腦組織中的NO含量、NOS活性，免疫組化方法觀察各個(gè)腦組織中的NOS陽性神經(jīng)元的表達(dá)，探討NO與HD發(fā)病機(jī)理的關(guān)系和N

4、OS抑制劑L-NNA對NO含量、NOS活性及NOS陽性神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。NOS活性檢測結(jié)果顯示:各組腦勻漿中總的一氧化氮合酶(TNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)以模型中的含量最高，到35d時(shí)基本恢復(fù)到正常水平;在紋狀體中，前期L-NNA治療組降低NOS活性的程度比鹽酸硫必利治療組的要好(P＜0.01)。NO含量檢測結(jié)果顯示:NO含量變化以模型組含量最高，各組兔額葉、海馬和紋狀體中的NO活性強(qiáng)弱基本與勻漿中的NOS含量變化相一

5、致。通過SABC免疫組織化學(xué)染色方法，在顯微鏡下對各組家兔的額葉、海馬和紋狀體中的神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)陽性神經(jīng)元和iNOS陽性神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)及分布進(jìn)行觀察。結(jié)果顯示:模型組中的nNOS陽性神經(jīng)元密度較正常對照顯著減少，胞體截面積減小，陽性神經(jīng)元輪廓不清，突起數(shù)減少;而iNOS陽性神經(jīng)元密度比正常對照顯著增加，胞質(zhì)染色加深，輪廓清晰，第一級突起數(shù)和胞體截面積都顯著增加。L-NNA組的iNOS陽性神經(jīng)元的各項(xiàng)指標(biāo)比硫必利組的低。

6、
　　結(jié)果表明，HD模型組通過定點(diǎn)注射喹啉酸導(dǎo)致紋狀體發(fā)生急性神經(jīng)毒性變性，使得紋狀體中的部分神經(jīng)元缺失死亡伴隨著iNOS陽性神經(jīng)元表達(dá)增強(qiáng)，NO含量增加，高濃度的NO發(fā)揮神經(jīng)毒性作用，提示NO參與了HD模型的發(fā)病過程，加劇了腦組織的損傷程度。NOS抑制劑L-NNA通過抑制NOS的活性，降低了腦組織中的NO含量，對HD腦神經(jīng)元起到保護(hù)作用。鑒于兔模型與HD病人腦組織病變的相似性，推測L-NNA和鹽酸硫必利均可用于亨廷頓舞蹈病的治療