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1、研究目的:本實(shí)驗(yàn)旨在觀察嗅鞘細(xì)胞(OECs)和L-NNA聯(lián)合作用對(duì)大鼠脊髓半橫斷損傷后背核神經(jīng)元存活及其軸突再生的影響。 研究方法:取SD雌性大鼠20只,體重200±20g,右側(cè)T11脊髓半橫斷后分四組處理:(1)對(duì)照組:脊髓半橫斷,損傷處移植浸有DMEM/F12培養(yǎng)液5μl的明膠海綿,術(shù)后每日腹腔注射生理鹽水;(2)OECs組:損傷處移植浸有OECs懸液5μl的明膠海綿,術(shù)后每日腹腔注射生理鹽水;(3)L-NNA組:損傷處移植
2、浸有DMEM/F12培養(yǎng)液5μl的明膠海綿,術(shù)后每日腹腔注射L-NNA(20mg/kg);(4)OECs+L-NNA組:損傷處移植浸有OECs懸液5μl的明膠海綿,術(shù)后每日腹腔注射L-NNA(20mg/kg)。5組動(dòng)物于術(shù)后26d在T9脊髓處注射熒光金,第30d被灌注取材,L1脊髓作連續(xù)冰凍橫切片(片厚30μm),NADPH-d組織化學(xué)染色加中性紅復(fù)染,10×40倍鏡下計(jì)數(shù)L1脊髓背核存活神經(jīng)元數(shù)包括其分類計(jì)數(shù),NOS表達(dá)情況以及背核有
3、無被熒光金標(biāo)記的神經(jīng)元。T8~T12脊髓作縱切片(片厚25μm),分別做NGFRP75、NF、LN、CSPG免疫熒光染色及損傷區(qū)HE染色,觀察移植細(xì)胞存活遷移情況以及損傷區(qū)與周圍宿主整合情況。 研究結(jié)果:①OECs組、L-NNA組L1背核神經(jīng)元存活數(shù)均高于對(duì)照組,且分類計(jì)數(shù)顯示這兩組對(duì)脊髓大、中、小神經(jīng)元存活均有促進(jìn)作用,而OECs+L-NNA組的促存活作用最顯著。②OECs組和OECs+L-NNA組L1損傷區(qū)可見NF陽(yáng)性纖維,
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