大鼠動脈粥樣硬化及氟伐他汀干預后差異表達基因研究對HSP60、ADMR表達的影響.pdf

1、研究目的：建立大鼠動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）模型，應用氟伐他汀進行干預，通過基因芯片技術，分別研究在動脈粥樣硬化過程中以及藥物干預后基因表達的變化，為動脈粥樣硬化的防治提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　1、普通級SD雄性大鼠45只，隨機分為3組，每組15只。A組，空白對照組；B組，AS組；C組，氟伐他汀干預組。A組喂養(yǎng)基礎飼料；B組喂養(yǎng)高脂飼料(基礎飼料+3％膽固醇、0.5％膽酸鈉、10％豬油、

2、0.2％丙基硫氧嘧啶和5％精制糖)+維生素D3；C組在喂養(yǎng)高脂飼料+維生素D3基礎上，給予氟伐他汀20mg/kg/天/只，自來水lml配制，灌胃。實驗周期為12周。
　　2、實驗開始時及進程中動態(tài)檢測各組血清甘油三脂（TG），總膽固醇（TC）及血鈣含量。
　　3、12周末處死存活大鼠，留取標本制作切片備HE染色，剩余標本置于液氮中速凍后-80℃保存，備用。
　　4、取出液氮保存的各組主動脈組織進行表達譜的基因芯片分析,

3、篩選差異表達基因。
　　5、從芯片分析結果中篩選HSP60、ADMR作為目的基因進行重點研究。
　　6、應用RT-PCR和Western blot等方法和技術觀察各組大鼠主動脈組織HSP60、ADMR的表達特點。
　　結果：
　　1、AS大鼠模型的制備實驗過程中C組大鼠飼養(yǎng)中1只死亡；B組大鼠1只AS模型未制備成功，1只死亡。
　　2、各組大鼠體重、血脂、血鈣比較0周時3組大鼠各指標差異無統(tǒng)計學意義。隨飼養(yǎng)

4、時間延長，A組、C組大鼠體重逐漸增加，以A組增加明顯；B組大鼠的體重在最初8周增長，到12周增長減緩；但組間差異無統(tǒng)計學意義。血TG，TC和血鈣濃度的變化經(jīng)組間方差分析各組間存在差異，與A組相比，B組TG、TC明顯升高(P<0.05)；與B組相比，C組TG，TC顯著下降（P<0.01）。與A組相比，B組、C組血鈣均明顯升高(P<0.05)。
　　3、各組大鼠主動脈病理改變（HE染色）：A組血管壁三層結構清晰，內膜光滑、薄，未見斑塊

5、生長；中膜平滑肌細胞排列整齊，排列規(guī)整與內彈力板平行。B組血管壁三層結構欠清晰，內膜粗糙、缺損不完整，細胞排列紊亂，中膜平滑肌增生、斷裂，排列不規(guī)則，纖維組織增生，彈性纖維層結構不清，在纖維帽深部可見大量鈣化灶及無定形物質，形成纖維增生性動脈粥樣硬化斑塊。C組血管病理介于A組與B組之間，血管壁三層結構尚清晰，內膜比較完整、欠光滑；可見鈣化灶及無定形物質，但明顯小于B組，平滑肌細胞排列尚整齊。
　　4、22575點基因芯片實驗結果：

6、B組與A組相比，上調表達的基因分別有610條，下調表達的基因分別為1018條，其中上調表達的基因包括了分子調控炎性反應基因（TNF-α、MCP-1、NF-κB等）、生長相關分子基因（TGFβ1、bFGF等）、凝血相關分子基因（TF等）、細胞增殖相關分子基因（PCNA等）、應激相關分子基因（HSP60等）及其他種類基因（如ADMR）；C組與B組相比，上調表達的基因有2255條，下調表達的基因有844條，其中下調表達的基因包括炎性反應基因（

7、如TNF-α、MCP-1）、生長相關分子基因（如TGFβ1、bFGF）、凝血相關分子基因（如TF）、細胞增殖相關分子基因（如PCNA）等，上調表達的基因例如ADMR、PGM1等。
　　5、HSP60mRNA的表達：B組較A組明顯升高（P<0.05），C組較B組無明顯差異（P>0.05）。
　　6、ADMRmRNA和蛋白的表達：B組較A組明顯升高，C組較B組顯著升高（P<0.05）。
　　結論：
　　1、采用高脂飲

8、食+維生素D3的方式，成功建立了實驗性AS的動物模型。
　　2、對AS大鼠進行的基因芯片的表達譜分析結果表明，與A組相比，B組主動脈組織基因表達產生了嚴重紊亂，多種基因表達得以上調和下調，這些差異性表達基因分別與炎癥、凝血、氧化應激、細胞增殖等相關。說明AS的發(fā)病機制非常復雜，有多種因素參與。
　　3、對AS大鼠進行氟伐他汀干預的基因芯片的表達譜分析結果表明，與B組相比，C組基因表達產生了新的變化，和炎癥、凝血、細胞增殖有關

9、的多種基因表達下調。進一步驗證了他汀類藥物的“多效性”。
　　4、AS過程中可檢測到HSP60表達升高，氟伐他汀干預后其表達變化不明顯。
　　5、HSP60可能是與血脂水平無關的動脈粥樣硬化預測因子，可能未參與氟伐他汀抗AS的分子機制。
　　6、AS過程中可檢測到ADMR表達升高，氟伐他汀干預后ADMR基因表達進一步升高，提示ADMR可能參與了氟伐他汀抗動脈粥樣硬化的作用機制。
　　綜上所述，本實驗應用基因芯片技