人血清章魚(yú)胺含量測(cè)定方法的研究與天然章魚(yú)胺補(bǔ)充劑的開(kāi)發(fā).pdf

1、章魚(yú)胺是一種重要的生物胺，作為內(nèi)源性的神經(jīng)介質(zhì)與β3-腎上腺素能受體激動(dòng)劑，章魚(yú)胺在能量的平衡與能量代謝的調(diào)節(jié)上有重要的作用，但其生物學(xué)意義與生理學(xué)作用尚未被充分認(rèn)識(shí)。人體各種器官特別是肝臟中的細(xì)胞色素P450酶系單加氧酶是體內(nèi)生物合成章魚(yú)胺的限速酶，有關(guān)糖尿病、肝病對(duì)細(xì)胞色素P450酶系單加氧酶活性的影響已有詳盡討論。章魚(yú)胺在人體內(nèi)也可以因單胺氧化酶作用而被降解，而單胺氧化酶活性過(guò)強(qiáng)與抑郁癥等精神疾患有關(guān)。因此，人血清章魚(yú)胺含量有可能

2、作為一項(xiàng)血液臨床生化檢驗(yàn)項(xiàng)目，在病理學(xué)和藥理學(xué)的研究中有潛在的價(jià)值。
　　 本論文分為兩個(gè)部分，第一部分建立了人血清中腎上腺素能受體激動(dòng)劑章魚(yú)胺檢測(cè)方法，為準(zhǔn)確快速測(cè)定人血清中章魚(yú)胺含量研究提供可靠的分析手段。第二部分是天然章魚(yú)胺補(bǔ)充劑的開(kāi)發(fā)，主要是水產(chǎn)品可食部章魚(yú)胺含量的研究，以及通過(guò)營(yíng)養(yǎng)性小鼠的減肥試驗(yàn)研究章魚(yú)胺對(duì)小鼠的減肥降脂作用。
　　 本論文目的之一是建立人血清中腎上腺素能受體激動(dòng)劑章魚(yú)胺檢測(cè)方法，據(jù)大多文獻(xiàn)介

3、紹，章魚(yú)胺的HPLC分析多為衍生化方法，但衍生化方法實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程繁瑣，且成本高。本試驗(yàn)想建立一種快速不需要衍生處理的HPLC檢測(cè)方法，先將人血清用流動(dòng)相稀釋5倍，經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)；在色譜條件的選擇中，我們用色譜柱：phenomenex luna C18(150×4.60mm，5μm)，流動(dòng)相：0.02mol·L-l檸檬酸-0.02mol·L-1磷酸二氫鈉(7∶3)，pH調(diào)為3，流速：0.8mL·min-l，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：2

4、20nm，進(jìn)樣體積：20μL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，此方法章魚(yú)胺在0.006～50μg·mL-1范圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均加樣回收率為104.4％，RSD為1.53％。最低檢出濃度為6.0ng·mL-1。此HPLC檢測(cè)方法不需要衍生處理，樣品用量少，可直接上機(jī)測(cè)定，具有良好的專(zhuān)一性，精密度和回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，具有微量、簡(jiǎn)便、快捷、靈敏等特點(diǎn)，能符合測(cè)定的要求。
　　 為證明上述方法的可靠性，

5、我們使用了HPLC柱前衍生方法與其進(jìn)行比較，通過(guò)使用HPLC柱前衍生方法測(cè)定人血清中章魚(yú)胺的含量。方法是先用高氯酸溶液提取，并用丹酰氯衍生；色譜條件的選擇中，我們用ODS反相柱，柱溫40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，用0.1mol/L醋酸銨和乙腈做流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為1.0ml/ml。章魚(yú)胺標(biāo)準(zhǔn)品用流動(dòng)相稀釋成0.001～20mg/L的梯度溶液，按照色譜條件檢測(cè)，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)回歸分析，章魚(yú)胺在0.001

6、～20mg/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.999。最低檢測(cè)限為6.0ng·mL-1。加低、中、高濃度標(biāo)準(zhǔn)品的回收率是90.0～110.0％。本實(shí)驗(yàn)方法靈敏、可靠，適合臨床診斷以及藥物研發(fā)中分析多種生物胺含量的研究。測(cè)出健康成年人血清章魚(yú)胺的含量是成年人為4.87±1.70μg·mL-1。與之前不用衍生的方法測(cè)出的結(jié)果健康成年人血清章魚(yú)胺含量為4.50±1.10μg·mL-1幾乎吻合。
　　 本論文目的之二是對(duì)天然章魚(yú)

7、胺的開(kāi)發(fā)，首先是對(duì)水產(chǎn)品可食部章魚(yú)胺含量的研究，我們測(cè)定了各種淡水和海水水產(chǎn)品可食部中β3-腎上腺素能受體激動(dòng)劑章魚(yú)胺的含量，為水產(chǎn)品中章魚(yú)胺的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。取魚(yú)、甲殼類(lèi)、頭足類(lèi)可食部位勻漿后超聲處理，用HPLC測(cè)定離心后上清液的章魚(yú)胺含量。結(jié)果表明8種淡水魚(yú)肉章魚(yú)胺含量在30～130μg·g-1之間，其中，背肉普遍比腹肉中含量高。海水魚(yú)以及淡水甲殼類(lèi)的章魚(yú)胺含量與淡水魚(yú)大致相似。海水甲殼類(lèi)中章魚(yú)胺含量特別高，是淡水、海水魚(yú)和淡水甲

8、殼類(lèi)的幾十倍，甚至千百倍。頭足類(lèi)的章魚(yú)胺含量也比較高，在海洋藻類(lèi)中未檢測(cè)出章魚(yú)胺。海洋貝類(lèi)等是水產(chǎn)品中章魚(yú)胺最豐富的來(lái)源，是減肥者與糖尿病人的理想食物。
　　 其次我們研究了章魚(yú)胺對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠的減肥作用。首先采用高脂飼料建立小鼠肥胖模型，以小鼠體重、Lee's指數(shù)、脂肪濕重、脂肪系數(shù)、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)等指標(biāo)的變化，研究章魚(yú)胺對(duì)小鼠的減肥作用。4周以后，肥胖對(duì)照組小鼠較普通對(duì)照

9、組小鼠體重、脂肪濕重、脂肪系數(shù)、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)含量均顯著增加(P＜0.05)，表明營(yíng)養(yǎng)肥胖模型構(gòu)建成功。建模成功后，對(duì)章魚(yú)胺高、中、低3個(gè)劑量組分別以60、30、15mg/kg-d劑量的章魚(yú)胺灌胃，陽(yáng)性藥對(duì)照組給予8mg/kg·d的祛脂瘦身膠囊，模型對(duì)照組及正常對(duì)照組給以等體積溶媒。灌胃4周后，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，章魚(yú)胺各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組中小鼠體重、脂肪濕重、脂肪系數(shù)、血清總膽固醇(TC)與