章魚過敏原的研究.pdf

1、食物過敏是人類比較常見的一種過敏性疾病，主要是由食物中的過敏原引起。人們發(fā)生食物過敏后，常出現(xiàn)腹瀉、哮喘、嘔吐等癥狀，嚴重時會虛脫、休克，甚至危及生命。水產(chǎn)類食物作為重要的過敏食物之一，由其引起的過敏反應(yīng)引起了世界人們的關(guān)注，在聯(lián)合國糧農(nóng)組織公布的八大類過敏食物中，水產(chǎn)品就占了兩大類。章魚作為重要的水產(chǎn)資源，因其肉質(zhì)鮮嫩、味道鮮美，具有很高的營養(yǎng)價值，深受消費者喜愛。隨著章魚消費量的增加，有關(guān)章魚過敏的報道也隨之增多，但是關(guān)于章魚過敏原

2、的研究較少，集中于主要過敏原——原肌球蛋白(TM)的純化及分析，對于章魚是否含有其他過敏原以及如何開發(fā)低致敏性章魚產(chǎn)品等方面尚未見報道。
　　本實驗首先對章魚TM進行分離純化、鑒定及性質(zhì)分析，并制備多克隆動物抗體；然后對章魚TM分別進行超聲聯(lián)合加熱、紫外照射、高溫高壓和美拉德反應(yīng)等加工處理方式；并采用模擬胃腸液消化實驗對不同處理后TM的消化穩(wěn)定性進行分析，進一步運用水產(chǎn)食物過敏患者血清對其致敏性進行鑒定；最后，對章魚肌肉進行熱處理

3、和高溫高壓處理，分析肌肉蛋白和TM的性質(zhì)變化。結(jié)果顯示，純化章魚TM的分子量為35 kDa，與蟹類TM具有免疫交叉反應(yīng)，是含糖量為1.3％的糖蛋白，且對熱和酸堿穩(wěn)定；超聲聯(lián)合加熱和紫外照射對章魚TM消化穩(wěn)定性及免疫活性影響不明顯，高溫高壓處理能夠有效降低TM的消化穩(wěn)定性和免疫活性；章魚TM與葡萄糖發(fā)生美拉德反應(yīng)，隨著反應(yīng)時間的延長，其產(chǎn)物的免疫活性逐漸降低，但其消化穩(wěn)定性卻有所增加；對章魚肌肉進行100℃蒸煮10 min和高溫高壓10

4、min處理，發(fā)現(xiàn)兩種處理方式均能夠一定程度地降低章魚TM的消化穩(wěn)定性，且高溫高壓處理效果更顯著。
　　本實驗還對章魚精氨酸激酶(AK)進行分離純化及鑒定，制備多克隆抗體；然后對其致敏性、熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性及消化穩(wěn)定性等理化性質(zhì)進行分析；最后將其與甲殼類動物過敏原AK進行分析比較。結(jié)果顯示，采用水產(chǎn)食物過敏患者血清對章魚肌漿蛋白進行免疫反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)能與血清發(fā)生特異性反應(yīng)的有50 kDa、38 kDa和26 kDa蛋白組分，其中最主要

5、的是38 kDa蛋白組分；進一步純化得到該38 kDa蛋白組分，應(yīng)用肽指紋圖譜對其進行分析鑒定，確定為章魚AK;對章魚AK的致敏性進行分析，確定其為章魚的一種新型過敏原，并制備得到了效價較高的多克隆動物抗體；章魚AK是含糖量為1.1％的糖蛋白，且對熱和酸堿均不穩(wěn)定，經(jīng)過不同條件的熱處理和pH處理后，章魚AK的免疫活性均受到明顯影響；章魚AK容易被胃蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶等消化酶降解。對章魚AK進行分子克隆，得到其全長基因序列和氨

6、基酸序列，并將章魚AK與甲殼類動物過敏原AK進行比較分析。結(jié)果顯示，章魚AK氨基酸序列比甲殼類動物AK少8個氨基酸殘基，且二者序列相似性僅為54％，但二者蛋白三維結(jié)構(gòu)高度相似，且抗原表位預測結(jié)果同樣具有一定的相似性；章魚AK能和甲殼類動物AK的多克隆動物抗體發(fā)生明顯的免疫交叉反應(yīng)；此外，章魚AK與甲殼類動物AK具有相似的致敏性，蟹AK能夠抑制章魚AK與IgE之間的特異性反應(yīng)。
　　總之，本研究主要是對章魚的過敏原TM和AK進行了詳