章魚胺介導(dǎo)的粘蟲幼蟲密度依賴的抗病免疫機(jī)制研究.pdf

1、免疫功能在昆蟲密度依賴的抗病性中起重要作用，但是有關(guān)密度依賴的免疫功能調(diào)節(jié)機(jī)制至今仍不清楚。前期研究發(fā)現(xiàn)，粘蟲存在幼蟲密度依賴的抗病性現(xiàn)象。本文從神經(jīng)激素的角度對(duì)粘蟲幼蟲密度依賴的抗病性機(jī)制進(jìn)行了研究，以期為昆蟲密度依賴的抗病性研究提供理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　室內(nèi)條件下(溫度23±1℃，RH70％±5％，光周期16L∶8D)研究了不同密度（1、2、5、10、30頭/瓶）飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲對(duì)病原菌的抵抗能力及酚氧化酶活力、血細(xì)

2、胞數(shù)量及溶菌酶活力的變化規(guī)律。結(jié)果表明:不同密度粘蟲幼蟲抵抗蘇云金芽孢桿菌(Bt)和球孢白僵菌的能力存在顯著差異。幼蟲感染Bt后的存活率以幼蟲密度10頭/瓶的最高，且顯著高于1、2、5頭/瓶的幼蟲。幼蟲感染球孢白僵菌后的存活率以幼蟲密度30頭/瓶的最高，顯著高于1、2頭/瓶。不同密度粘蟲幼蟲的酚氧化酶活力、血細(xì)胞總數(shù)的變化規(guī)律與幼蟲對(duì)病原菌的抵抗能力較一致。幼蟲酚氧化酶活力以10頭/瓶密度下最高，顯著高于1和2頭/瓶。幼蟲血細(xì)胞總數(shù)以5

3、、10、30頭/瓶的顯著高于1和2頭/瓶。結(jié)果表明，不同密度粘蟲幼蟲酚氧化酶活力和血細(xì)胞總數(shù)的改變是導(dǎo)致幼蟲抗病性增強(qiáng)的主要原因。
　　利用ELISA試劑盒測(cè)定了不同密度（1、2、5、10、30頭/瓶）飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲血淋巴中章魚胺、5-羥色胺及多巴胺的含量，結(jié)果表明:密度對(duì)粘蟲幼蟲章魚胺和多巴胺含量影響顯著。章魚胺含量以5、10、30頭/瓶的幼蟲顯著高于1、2頭/瓶。多巴胺含量以1、2頭/瓶的幼蟲顯著高于5、10和30頭/瓶。通過

4、分別注射外源不同濃度的章魚胺、多巴胺以及章魚胺受體拮抗劑（依匹斯?。┖螅紫x酚氧化酶活力和血細(xì)胞總數(shù)的測(cè)定結(jié)果表明，外源章魚胺能明顯促進(jìn)幼蟲酚氧化酶活力升高以及血細(xì)胞總數(shù)的增加;但外源多巴胺對(duì)幼蟲酚氧化酶活力及血細(xì)胞的總數(shù)無顯著影響。依匹斯汀能顯著抑制幼蟲酚氧化酶活力及血細(xì)胞的數(shù)目的增加。另外，注射外源章魚胺的粘蟲幼蟲感染白僵菌后的存活率顯著地高于注射生理鹽水的對(duì)照組。以上結(jié)果表明，不同密度粘蟲幼蟲章魚胺含量的改變，是引起幼蟲免疫功能變

5、化的主要原因。
　　利用ELISA試劑盒測(cè)定了不同密度（1、2、5、10、30頭/瓶）飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲頭部及腹部的酪氨酸脫羧酶(Tdc)和酪胺-β羥化酶(Tβh)的活力。結(jié)果表明:幼蟲密度對(duì)粘蟲的Tβh活力影響顯著，而對(duì)Tdc活力影響不顯著。幼蟲頭部及腹部的Tβh活力均以幼蟲密度10、30頭/瓶的顯著高于1、2、5頭/瓶，而不同密度幼蟲的頭部及腹部的Tdc活力無顯著差異。通過基因克隆獲得了Tβh的基因片段，其長(zhǎng)度為811bp。實(shí)時(shí)熒