EEN-B1及其甲基化在外陰鱗狀細胞癌中的表達及意義.pdf

1、目的：
　　研究外陰病變組織及外陰鱗癌細胞系A-431中EEN-B1基因表達情況及其甲基化水平，探討該蛋白表達與該基因甲基化的關系及兩者在外陰鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　運用免疫組化方法和Westernblot法檢測外陰病變組織標本中EEN-B1蛋白表達情況，采用重亞硫酸鹽測序PCR聯(lián)合TA克隆測序法檢測外陰鱗癌組織中EEN-B1啟動子甲基化情況。將甲基轉移酶抑制劑5-Aza-dc作用于A-431細胞系，運

2、用Westernblot及BSP法檢測處理前后EEN-B1蛋白表達及基因甲基化水平的變化，采用MTT法及流式細胞術檢測處理前后A-431細胞增殖及凋亡情況。
　　結果：
　　EEN-B1蛋白在外陰鱗狀細胞癌組織中表達陽性率為48.08％，在外陰上皮內瘤變組織中的陽性率為68.08％，在正常外陰組織中表達陽性率為100％。外陰鱗癌、外陰上皮內瘤變與正常外陰組織分別比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Westernblot檢

3、測得到同樣的結果，在外陰鱗癌、外陰上皮內瘤變及正常外陰組織中該蛋白表達陽性率分別為6.67％(1/15)、26.67％(4/15)、100％(15/15)，差異具有顯著性;BSP聯(lián)合TA克隆測序法檢測發(fā)現(xiàn)外陰鱗癌組織中EEN-B1啟動子的甲基化率為54.66％，與正常外陰組織的12.16％相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);經(jīng)10-7mol/L5-Aza-dc處理A-431細胞系72小時后，EEN-B1啟動子的甲基化率由67.05

4、％下降至26.82％(P＜0.05)，而該蛋白表達明顯上調。MTT法檢測5-Aza-dc可抑制A-431細胞的增殖，隨濃度增大、作用時間的延長抑制作用更明顯。流式細胞術檢測顯示5-Aza-dc的濃度為10-6mol/L時，細胞凋亡率最高。
　　結論：
　　1、EEN-B1蛋白表達下降在外陰鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定作用。
　　2、EEN-B1表達下降的原因之一可能為其啟動子的甲基化。
　　3、5-Aza-dc