口腔鱗狀細胞癌中Dickkopf-3基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及mRNA表達的研究.pdf

1、目的：口腔癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，位居人類全身惡性腫瘤的第六位。目前，我國口腔癌的發(fā)病率居高不下，經流行病學調查研究表明其病因與吸煙、飲酒、口腔衛(wèi)生等多種因素相關，且呈年輕化的趨勢。盡管隨著多學科綜合序列治療模式的引入使口腔癌的治療取得了一定程度上的突破，但其五年生存率仍不理想。DKK-3(Dickkopf-3)作為Wnt信號傳導通路中重要的抑制劑之一，先后在肺癌、食管癌、甲狀腺癌等惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)其 mRNA的低表達及啟動子區(qū)的高

2、甲基化狀態(tài)，提示 DKK-3可作為候選抑癌基因參與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。但目前關于DKK-3基因在口腔頜面部惡性腫瘤中的研究仍鮮有報道。因此，本實驗通過檢測口腔鱗狀細胞癌組織及相應正?？谇火つそM織中DKK-3基因mRNA的表達水平及其啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)，探索DKK-3基因與口腔癌發(fā)生發(fā)展的關系，為DKK-3成為新的口腔癌靶基因治療的生物學指標提供理論依據。
　　方法：
　　選取河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院口腔科2014年09月至2

3、015年12月手術切除的原發(fā)口腔鱗癌組織為研究對象，癌旁2cm處的正?？谇火つそM織為對照。術后經病理證實癌組織標本為鱗狀細胞癌，癌旁組織非腫瘤組織。所用標本均為術后立即取材，于-80°冰箱中凍存。應用RT-PCR及甲基化特異性PCR(Methylation-Specific PCR，MSP)的方法分別檢測DKK-3基因在口腔鱗癌組織及相應正常黏膜組織 mRNA的表達情況及其啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)，并運用統(tǒng)計軟件 SPSS13.0對數據進行

4、統(tǒng)計學處理，分析DKK3與年齡、性別、吸煙、臨床分期及有無淋巴結轉移等各臨床病理特征的關系。
　　結果：1 DKK-3基因 mRNA在口腔鱗癌組織中的相對表達量為0.41±0.27，在其對應正?？谇火つぶ邢鄬Ρ磉_量為0.50±0.29，經統(tǒng)計學分析，二者差異有統(tǒng)計學意義(t=-12.580，P<0.05)。同時，吸煙組DKK-3基因 mRNA的相對表達量0.22±0.16低于不吸煙組 mRNA相對表達量0.63±0.21（t=-8

5、.018，P<0.05）；臨床Ⅰ期、Ⅱ期的 DKK-3基因 mRNA的相對表達量0.46±0.29高于臨床Ⅲ期、Ⅳ期 mRNA的相對表達量0.28±0.19（t=2.214，P<0.05）；有淋巴結轉移組 DKK-3基因 mRNA的相對表達量0.24±0.17低于無淋巴結轉移組 mRNA的相對表達量0.50±0.28（t=-4.114，P<0.05），DKK-3基因mRNA的相對表達量與性別和年齡無關（P＞0.05）；2 DKK-3基因

6、啟動子區(qū)在口腔鱗癌組織中的甲基化率為49.0％（25/51），明顯高于其對應正?？谇火つそM織的甲基化率7.8％（4/51）（χ2=19.273，P<0.05）。同時，吸煙組的甲基化率64.3%（18/28）高于不吸煙組甲基化率30.4%（7/23）（χ2=5.790，P<0.05）；臨床Ⅰ期、Ⅱ期的甲基化率38.9％（14/36）低于Ⅲ期、Ⅳ期的甲基化率73.3％（11/15）（χ2=5.027，P<0.05）；但是DKK-3基因啟動子

7、區(qū)在口腔鱗癌組織中的甲基化率與性別、年齡及有無淋巴結轉移無關（P＞0.05）；3 DKK-3基因發(fā)生甲基化的口腔鱗癌組織mRNA的相對表達量0.30±0.21低于未發(fā)生甲基化的口腔鱗癌組織 mRNA的相對表達量0.51±0.29（t=-2.817，P<0.05）。
　　結論：
　　1口腔鱗癌組織中DKK-3基因mRNA的相對表達量低于正?？谇火つそM織。該結果提示在口腔鱗癌中DKK-3基因可能是抑癌基因，其表達下調或沉默可能導

8、致了口腔癌的發(fā)生與發(fā)展，該基因的異常表達與吸煙、臨床分期及有無淋巴結轉移有關，與性別和年齡無關。
　　2口腔鱗癌組織中DKK-3基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)明顯高于相應正?？谇火つそM織。提示DKK-3基因啟動子區(qū)的高甲基化狀態(tài)可能是口腔癌發(fā)病的重要機制之一，同時，該基因啟動子的異常甲基化狀態(tài)與吸煙和臨床分期有關，與性別、年齡及有無淋巴結轉移無關。
　　3在口腔鱗癌組織中 DKK-3基因 mRNA在甲基化陽性病例中的相對表達量低于甲