TLR7和NF-κB在外陰硬化性苔癬和外陰鱗狀細胞癌中的表達.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　 探討TLR7和NF-κB在外陰硬化性苔癬和外陰鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展過程中的表達及作用。
　　 實驗方法：
　　 一、材料
　　 收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院婦科手術(shù)病人石蠟組織標本，分別取外陰的正常皮膚組織12例、外陰硬化性苔癬組織20例、外陰鱗狀細胞癌組織20例。以上標本均已經(jīng)過病理科出具病理證實。
　　 二、試劑
　　 兔抗人單克隆抗體TLR7購于北京博奧森，兔抗人單

2、克隆抗體NF-κB65購于Santa Cruz，兔spkit超敏試劑盒購于北京中杉金橋，PBS(Phosphate bufferedsolution，磷酸鹽緩沖液)，DAB(Diaminobenzidine，3，3-二氨基苯聯(lián)胺)，重鉻硫酸，二甲苯，梯度酒精，3％雙氧水，正常非免疫動物血清，鏈霉菌抗生物素一過氧化物酶溶液，生物素標記的第二抗體等。
　　 三、免疫組化檢測
　　 采用免疫組化SP法分別檢測TLR7和NF-κ

3、B65在外陰硬化性苔鮮組織20例、外陰鱗狀細胞癌組織20例、取12例外陰正常皮膚組織作對照。
　　 四、結(jié)果判定
　　 應(yīng)用AX70萬能顯微照相系統(tǒng)(OLYMPUS，日本)進行圖像采集，TLR7陽性染色定位于細胞漿，NF-κB陽性染色定位于細胞核、部分細胞漿，細胞染色強度分為：陰性(-)為不著色，弱陽性(+)為淡黃色，陽性(++)為棕黃色，強陽性(+++)為深棕黃色。應(yīng)用顯微圖像分析系統(tǒng)Meta Morph(UIC/OL

4、US.US/JP)進行積分光密度測定，每張切片選取5個不同視野，計算同一張切片的平均光密度值，其代表陽性染色細胞在該組織中的表達水平。
　　 五、統(tǒng)計學分析
　　 利用SPSS11.5統(tǒng)計分析軟件，各組計量資料的結(jié)果進行t檢驗。P<0.05表示組間有顯著性差異，有統(tǒng)計學意義。
　　 實驗結(jié)果：
　　 TLR7陽性細胞在正常外陰皮膚中全層均有表達，強度為++～+++，TLR7條帶光密度值為0.2793±0.

5、0946；在外陰硬化性苔癬組織中全層或下1/3層表達，強度為+～++，TLR7條帶光密度值為0.25379±0.0784；兩者相比有顯著性差異，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在外陰鱗狀細胞癌中主要在癌巢表達，強度為+++，TLR7條帶光密度值為0.27034±0.1391，與外陰正常皮膚相比無顯著性差異，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。外陰鱗狀細胞癌與外陰硬化性苔癬相比有顯著性差異，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 NF-κB

6、65陽性細胞在正常外陰皮膚表皮中表現(xiàn)為近基底細胞和基底細胞陽性，強度為+～+++，NF-κB65條帶光密度值為0.27136±0.0526；在外陰硬化性苔癬組織中表現(xiàn)為全層下1/3陽性，強度為-～+，NF-κB65條帶光密度值為0.2476±0.0687；兩者相比有顯著性差異，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在外陰鱗狀細胞癌組織中主要在癌巢表達，強度為++～+++，NF-κB65條帶光密度值為0.327±0.0691，與外陰正常皮膚相比有