子宮內(nèi)膜上皮細胞整合素αvβ3超表達及其對胚胎黏附的影響.pdf

1、子宮內(nèi)膜上皮細胞整合素伐v133超表達及其對胚胎黏附的影響中文摘要一、目的和意義胚胎著床(Emb巧oimplantation)是處于活化狀態(tài)的胚胎定位、黏附、入侵并最終植入容受態(tài)子宮內(nèi)膜的復雜過程。胚胎的侵入能力和子宮內(nèi)膜容受性(Endometrialreceptivity，ER)的建立是胚胎成功著床的關(guān)鍵。隨著輔助生殖技術(shù)(Assistedreproductivetechnology，ART)的發(fā)展，個體化的控制性超促排卵方案、受精及

2、實驗室胚胎培養(yǎng)技術(shù)的進步使胚胎質(zhì)量得到了顯著提高，但低種植率始終是生殖醫(yī)學領(lǐng)域尚未解決的難題之一。子宮內(nèi)膜容受性受損可能是導致胚胎低種植率的主要原因，而無法診斷和治療子宮內(nèi)膜容受性受損是ART成功的主要障礙。因此，評估和改善子宮內(nèi)膜容受性對提高ART成功率具有極其重要的臨床意義，探究子宮內(nèi)膜容受性標志物及其作用機制是改善內(nèi)膜容受性和提高妊娠率的基礎(chǔ)。整合素Qv133(Integrinalphavbeta3，ITGAVB3)特異性表達于子

3、宮內(nèi)膜種植窗期(Windowofimplantation，WOI)，其表達異常使子宮內(nèi)膜容受性受損，與不孕癥的發(fā)生密切相關(guān)，是目前公認的子宮內(nèi)膜容受性重要生物學標志之一，但其在胚胎著床過程中的具體作用機制目前仍不明確。本研究通過構(gòu)建整合素QvB3真核表達載體，使子宮內(nèi)膜上皮細胞的整合素av133水平超表達，觀察其對胚胎細胞球狀體黏附的影響，初步探討整合素Qv133在胚胎黏附過程中的作用機制，為進一步闡明其在胚胎著床及生殖過程中的功能及分

4、子機制提供研究基礎(chǔ)。二、方法1構(gòu)建pcDNA313FLAGITGAV、pcDNA313FLAGITGB3真核表達載體，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人子宮內(nèi)膜上皮細胞(RL952細胞)。2經(jīng)RealtimeRTPCR檢測整合素Qv(ITGAV)、整合素133(ITGB3)及骨橋蛋白(OPN)的mRNA表達。3經(jīng)流式細胞術(shù)、間接免疫熒光檢測ITGAV、ITGB3的蛋白表達。4建立Bewo細胞球狀體與RL952細胞單層的體外胚胎著床模型，通過黏附實驗觀察和

5、分析整合素avl33超表達對胚胎與子宮內(nèi)膜上皮細胞的黏附情況的影響，經(jīng)間接免疫熒光Integrinalphavbeta3overexpressionofendometrialepithelialcellsanditseffectsonembryoadhesionIObjectiveandpurposeAbstractIIIEmbD，oimplantationisacomplexprocessduringwhichtheactiveemb

6、叮oorients，adheres，invadesandfinallyimplantsintothereceptiveuterineendometriumTheinvasiveabilityofemb叫oandendometrialreceptivityaretwokeyfactorsofsuccessfulemb巧oimplantationWiththedevelopmentofassistedreproductivetechnolo

7、gy(ART)，individualizedcontrolledovarianhyperstimulationandadvancedfertilizationandemb巧oculturetechnologyhassignificantlyimprovedtheemb巧oquality，butthelowimplantationrateisalwaysoneoftheunresolvedproblemsinthefieldofRepro

8、ductiveMedicineTheimpairedreceptivityofendometriummaybethemainfactorleadingtOlowimplantationrate，whileunabletodiagnoseandtreattheimpairedendometrialreceptivityisamajorobstacletOtheSuccessofARTTherefore，assessmentandimpro

9、vementofendometrialreceptivityisofextremelyimportantclinicalsignificancetoimprovetheSUCCESSrateofARTexploringmarkersofendometrialreceptivityandstudythemechanismisthebasistoimproveendometrialreceptivityandpregnancyrateInt

10、egrinalphavbeta3(ITGAVB3)specificallyexpressesinthewindowofimplantation(WOI)，itsabnormalexpressionleadstoimpairedendometrialreceptivityandcloselyrelatestotheincidenceofinfertilityIntegrinalphavbeta3isnowrecognizedasoneof

11、theimportantbiologicalmarkersofendometrialreceptivity，butthespecificmechanismintheprocessofemb拶oimplantationremainsunclearInthisstudy，theintegrinalphav(ITGAV)overexpressionvectorandintegrinbeta3(ITGB3)overexpressionvecto

12、rwereconstructed，andtheendometrialepithelialcellsweretranscendtoobservetheeffectsontheadhesionofembryonicspheroidstotheintegrinalphavbeta3overexpressedendometrialepithelialcellmonolayer，investigatetherolesofintegrinalpha