體外長期培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞不同時(shí)相生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的:
　　 探討體外長期培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在不同時(shí)相的生物學(xué)特性的變化，為干細(xì)胞的體外安全性評(píng)估提供可靠的研究依據(jù)。
　　 方法:
　　 采用密度梯度離心、貼壁培養(yǎng)相結(jié)合的方法分離hBMSCs，進(jìn)行長期體外培養(yǎng)。在不同培養(yǎng)時(shí)相，采用相差顯微鏡記錄hBMSC的形態(tài)變化，并記錄不同代數(shù)的細(xì)胞傳代所需時(shí)間，同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測不同培養(yǎng)時(shí)相的細(xì)胞表面標(biāo)志抗原表達(dá)變化和細(xì)胞周期變化。
　　 結(jié)果:

2、　　 采用密度梯度離心、貼壁培養(yǎng)相結(jié)合的方法成功分離出hBMSCs，體外長期培養(yǎng)并追蹤觀察了25代，共248天。原代細(xì)胞培養(yǎng)早期（第15代之前），細(xì)胞的各項(xiàng)指標(biāo)相對(duì)穩(wěn)定;而培養(yǎng)后期，細(xì)胞形態(tài)、增殖速度、細(xì)胞表面標(biāo)志抗原表達(dá)均發(fā)生改變，表現(xiàn)為:生長速度減慢;CD44、CD90表達(dá)明顯下降;處于靜止期的細(xì)胞顯著減少，處于活躍增殖期的細(xì)胞比例顯著增加，凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯增加。
　　 結(jié)論:
　　 體外長期培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞