兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)、鑒定的研究.pdf

1、目的：探討體外培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells．MSCs)的方法，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究打下基礎(chǔ)。 方法：選擇健康家兔，于脛骨行骨髓穿刺，提取動(dòng)物骨髓，采用密度梯度離心法分離提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，通過貼壁培養(yǎng)篩選、純化獲得的MSCs，傳代培養(yǎng)，對(duì)第2、3、4、5、6代MSCs應(yīng)用MTT法測(cè)定生長(zhǎng)曲線，分析MSCs的生長(zhǎng)規(guī)律，對(duì)MSCs進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，通過流式細(xì)胞儀，對(duì)CD34、CD45、CD105三

2、種表面抗原進(jìn)行鑒定，證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為MSCs。 結(jié)果：原代培養(yǎng)的MSCs接種12小時(shí)后開始貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)為均勻成梭形，生長(zhǎng)增殖迅速，符合MSCs生長(zhǎng)的特性，7-10天MSCs融合接近80﹪，傳代培養(yǎng)生長(zhǎng)良好。MSCs生長(zhǎng)曲線呈S型，由生長(zhǎng)曲線分析可知，MSCs在培養(yǎng)第3-7天為高速生長(zhǎng)期，MSCs在第3-5代生長(zhǎng)最為旺盛，并且培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定，CD34(-)、CD45(-)、CD105(+)，證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為較純的